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目的全基因组关联研究(GWAS)发现多个与乳腺癌发病风险相关的SNP位点位于基因CCDC170和ESR1之间。本课题组前期发现CCDC170与ESR1表达高度相关,CCDC170在不同病理分子分型中的表达差异明显,并且影响患者预后。之后,我们使用MCF-7细胞瞬时转染CCDC170真核表达载体24h及48h,进行全基因组mRNA扫描,pathway分析,寻找表达相关基因。其中,IRE1是内质网未折叠蛋白反应(UPR)通路关键基因,编码蛋白IRE1α可以剪切下游XBP1的前体mRNA启动UPR反应,调节细胞的生存状态。XBP1可与靶基因启动子区的X盒序列结合,发挥转录因子的作用。XBP1可与ERα相结合,并能提高ESR1的转录活性。本研究旨在探讨IRE1α,CCDC170,ERα及XBP1与各临床参数的关系及四者可能存在的相互调控关系。方法通过微阵列(Microarray)技术,IPA分析筛选出表达相关基因IRE1;下载TCGA数据,分析CCDC170与IRE1α,XBP1及ERα在mRNA表达水平上的相关性。选取本院2008年11月至2009年4月期间收治的乳腺浸润性导管癌患者的病例100例。免疫组化染色方法检测乳腺癌组织切片中CCDC170、IRE1α及XBP1的组织蛋白表达情况。应用SPSS19.0软件进行统计数据的分析。应用Graphpadprism 5.0进行绘图,所有统计均为双侧概率检验,检验水准按双侧α=0.05进行,P<0.05时有统计学意义。Western Blotting实验观察上调CCDC170对IRE1α、XBP1及ERα蛋白表达量的影响;免疫荧光技术观察细胞骨架蛋白变化;并观察过表达CCDC170后,IRE1α、XBP1及ERα的荧光强度变化;为进一步的分子作用机制研究提供依据。结果1.IPA分析上调CCDC170不同时间(24h,48h)后,mRNA全基因组扫描发现IRE1的表达均升高。2.TCGA数据相关分析分析TCGA数据发现,IRE1、ERα及XBP1在mRNA水平上的表达均与CCDC170存在正相关关系。3.蛋白CCDC170、IRE1α及XBP1在乳腺癌组织中的表达蛋白CCDC170主要定位于细胞浆,阳性表达者占87.0%;其中表达(+)、(++)及(+++)者依次为37例、35例和15例。表达阴性者13例(13.0%)。蛋白IRE1α主要定位于细胞浆,阳性表达者占84.0%;其中表达水平(+)、(++)及(+++)者依次为57例、19例和8例。表达阴性者16例(16.0%)。蛋白XBP1主要定位于细胞核,阳性表达者占93.0%;其中表达(+)、(++)及(+++)者依次为35例、33例和25例。表达阴性者为7例(7.0%)。4.CCDC170、IRE1α及XBP1组织水平的表达与临床病理参数的相关性经分析发现:CCDC170的表达水平与ERα(r=0.306,P=0.002)成正相关,与Her-2表达成负相关(r=-0.202,P=0.044);IRE1α与Her-2表达成正相关(r=0.315,P=0.001);XBP1与ERα表达(r=0.280,P=0.005)及淋巴结转移情况(r=0.248,P=0.013)成正相关。5.CCDC170、IRE1α及XBP1组织蛋白表达与预后的相关分析单因素生存分析发现:CCDC170及XBP1的表达水平,淋巴结状态,病理TNM分期明显影响患者的总生存时间;肿瘤大小,淋巴结转移情况,病理TNM分期影响患者的无病生存时间。经Cox多因素分析,除病理TNM分期外,CCDC170的表达水平是影响患者总生存时间的独立因素。6.CCDC170对细胞蛋白表达的影响Western Blotting实验发现过表达CCDC170 24h后,IRE1α表达量升高;48h后,IRE1α、ERα及XBP1表达量均升高;免疫荧光实验发现上调CCDC170,细胞骨架蛋白Tubulin的分布发生变化;IRE1α、ERα及XBP1的荧光信号增强,其中XBP1的变化更明显。结论1.TCGA数据库中,CCDC170与ERα、IRE1α及XBP1的mRNA表达均呈正相关关系。2.CCDC170与IRE1α为胞浆蛋白,XBP1为胞核蛋白。CCDC170与ERα的表达成正相关,与Her-2成负相关;IRE1α与Her-2成正相关;XBP1与淋巴结转移、ERα成正相关;提示三者可能与乳腺癌的发生发展有关。3.单因素生存分析见CCDC170、XBP1的表达水平对患者总生存的影响有统计学意义;CCDC170表达高,患者预后好;XBP1表达高,预后差;多因素分析仅见CCDC170独立影响患者总生存时间。因此,更可靠的预后提示作用尚待扩大样本量进一步分析。4.CCDC170可改变细胞骨架蛋白Tubulin的分布,并促进IRE1α、ERα及XBP1蛋白的表达且转染48h比24h明显,提示CCDC170,IRE1α,ERα及XBP1之间可能存在潜在的调控机制。