第一部分：B7-H3在中性粒细胞哮喘患儿体内的表达及临床意义　　目的：　　通过检测B7-H3在中性粒细胞哮喘患儿（NA）急性发作时外周血及支气管肺泡灌洗液（BALF）的表达水平，比较B7-H3水平与Th1、Th2、Th17相关细胞因子和BALF中性粒细胞百分比（NEU%）相关性，分析B7-H3在中性粒细胞哮喘儿童急性发作期气道中性粒细胞炎症的作用及临床意义。　　方法：　　选取2015年1月～2016年12月在苏州大学附属儿童医院呼吸科住院并符合儿童支气管哮喘诊断标准的患儿42例为研究对象，哮喘患儿在入院2~5d内（急性期）行电子支气管镜检查。根据患儿BALF中NEU%是否?48%，分为中性粒细胞哮喘组(A组)20例和非中性粒细胞哮喘组（B组）22例，并选取同期在苏州大学附属儿童医院因支气管异物行支气管镜检查的儿童16例作为对照组（C组）。所有患儿入院24小时内采集外周血，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测所有患儿血浆和BALF上清中 B7-H3、INF-γ、IL-4、IL-6、IL-8、IL-17、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）细胞因子表达水平，并分析B7-H3与这些细胞因子和BALF中NEU%的相关性。　　结果：　　A组血浆和BALF中B7-H3、IL-4、IL-6、IL-8、IL-17、GM-CSF、MMP-9、NE水平均显著高于C组（均P<0.05）；A组血浆和BALF中IL-6、IL-8、IL-17和MMP-9水平均显著高于B组（均P<0.05），A组BALF中B7-H3、GM-CSF、NE水平高于B组，差异具有统计学意义（均P<0.05）；B组患儿血浆和BALF中B7-H3、IL-4、IL-6、IL-17、GM-CSF水平比 C组均显著升高（均 P<0.05）；IFN-?水平在 B组血浆和BALF中低于A组和C组（P<0.05）。A组血浆和BALF中B7-H3水平与IFN-?、IL-6、IL-8、IL-17及MMP-9水平呈正相关（均r>0.3，P<0.05）；A组BALF中B7-H3水平与GM-CSF、NE及BALF中NEU%呈正相关（均r>0.3，P<0.05）；B组血浆和BALF中B7-H3水平与IL-4和IL-17水平呈正相关（均r>0.3，P<0.05）。　　结论：　　NA患儿急性期血浆和BALF中B7-H3及Th17相关细胞因子水平较非中性粒细胞哮喘患儿及正常对照组明显升高，而且B7-H3水平与Th17相关细胞因子水平及BALF中NEU百分比呈正相关，表明共刺激分子B7-H3在NA患儿可能通过上调Th17细胞免疫应答参与气道中性粒细胞炎症的发生发展及对肺组织的损伤，从而导致哮喘急性发作，以此推测 B7-H3的异常表达通过正性调控 Th17细胞功能参与NA气道炎症的免疫调控作用和发病机制。　　第二部分：抗B7-H3单克隆抗体对中性粒细胞哮喘小鼠模型的作用研究　　目的：　　探讨抗B7-H3单克隆抗体对中性粒细胞哮喘（NA）小鼠模型的治疗作用。　　方法：　　选取6~8周SPF级BALB/C雌性小鼠24只，随机分成4组，每组6只，分别为磷酸缓冲盐溶液（PBS）对照组（A组），中性粒细胞哮喘组（B组），抗B7-H3单克隆抗体干预组（C组），同型对照IgG组（D组）。B、C、D组均给予OVA联合LPS致敏，OVA雾化激发（0、7、14天OVA联合LPS腹腔注射致敏，第21天予OVA雾化半小时，连续雾化一周激发），A组给予同等剂量的PBS注射和激发。C组和D组在第0、3、7、10、14天分别腹腔注射相同剂量的抗B7-H3单克隆抗体和同型对照IgG，观察小鼠雾化时的症状。各组小鼠在最后一次雾化激发24h后麻醉处死，收集血浆、支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织。显微镜下进行BALF细胞总数及分类计数；采用ELISA检测小鼠血浆及BALF上清中IFN-?、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、IL-17、TNF-?、G-CSF细胞因子的水平；小鼠肺组织病理切片HE染色观察炎症性改变、炎性细胞包括中性粒细胞的浸润；PAS染色观察气道粘液的分泌；同时肺组织免疫组化法检测B7-H3阳性细胞表达水平。　　结果：　　①B组和D组小鼠雾化激发后出现呼吸急促、烦躁不安、频繁搔抓头面部等表现，C组喘息症状较B组有所缓解，A组活动自如。　　②B组、C组、D组BALF细胞总数、中性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比及淋巴细胞百分比较 A组均显著升高，而巨噬细胞百分比显著下降（均P<0.05）；C组BALF细胞总数、中性粒细胞百分比和嗜酸性粒细胞百分比较B组、D组明显降低（均P<0.05）；B组与D组比较无显著差异。　　③B组、C组、D组血浆和BALF中IFN-?、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、IL-17、TNF-?、G-CSF水平较A组均显著性上升，其中B组、D组血浆和BALF中IL-17和G-CSF水平比C组增高，B组、D组BALF中IL-6、TNF-?水平明显高于C组（均P<0.05）；血浆和BALF中IL-4水平B组和D组低于C组（均P<0.05）；B组、C组、D组血浆和BALF中IFN-?、IL-5、IL-13水平两两比较无显著性差异。　　④A组肺组织病理染色示无明显炎症细胞及粘液分泌；B组和D组炎症细胞、中性粒细胞浸润和粘液分泌较A组明显，C组较B组、D组有所减轻。　　⑤肺组织免疫组化显示A组几乎无表达B7-H3阳性细胞，B组和D组B7-H3阳性细胞数明显增多，C组较B组、D组阳性细胞数明显减少（P<0.05）。　　结论：　　抗B7-H3单克隆抗体早期干预能够减轻中性粒细胞炎症哮喘小鼠喘息症状，减少肺组织炎症细胞及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的浸润和粘液的分泌，下调Th1/Th17相关细胞因子和前炎症细胞因子的分泌，从而减轻NA小鼠局部及全身炎症反应、减轻肺组织炎症损伤，部分阻断NA免疫致病机制的发生发展。抗B7-H3单克隆抗体也许从发病机制为NA的治疗提供了新的方法。