硫辛酸对肉鸡骨骼肌发育及缓解黄曲霉毒素中毒机理的研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuzhigang3481
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本研究首先通过体内与体外试验研究硫辛酸(ALA)对肉鸡骨骼肌发育相关基因表达、肌纤维类型转化和抗氧化能力的影响。另外,利用ALA具有抗氧化和抗炎性的特性,研究ALA缓解肉鸡黄曲霉毒素中毒的效果及机制。试验一研究日粮中添加ALA对肉鸡生产性能、骨骼肌发育相关基因表达、肌纤维类型转化和肌肉抗氧化能力影响。选取80只健康公雏,随机分成2个处理组,在基础日粮上添加ALA(300mg/kg),以饲喂基础日粮为对照组,试验期21天。结果表明:ALA显著降低肉仔鸡平均日增重(ADWG)(P<0.05),对平均日耗量(ADFI)有降低趋势(P=0.0532);日粮中添加ALA显著降低肉仔鸡胸肌绝对重量(P<0.05),对胸腿肌相对重量和腿肌绝对重量没有影响(P>0.05); ALA显著降低肉仔鸡血液中甘油三酯、葡萄糖和甲状腺激素3水平(P<0.05); ALA显著降低胸肌中丙二醛(MDA)水平(P<0.05),显著增加胸腿肌中谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽还原酶(GR)、Na+-K+-ATP和Ca2+-Mg2+-ATP酶(P<0.05)水平,对腿肌中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性有增加趋势(P=0.0622); ALA显著增加肉仔鸡胸腿肌慢肌(SM)和腿肌快红肌(FRM)肌球蛋白重链基因(MyHC) mRNA相对表达量(P<0.05),并显著降低胸腿肌快白肌(FWM) MyHC基因相对表达量(P<0.05);另外,显著降低胸肌生肌决定因子(MyoD)、生肌因子(Myf5)和肌肉生长抑制素基因表达量(P<0.05),显著降低胸肌MyoD、Myf5、胰岛素样生长因子Ⅰ和1胰岛素样生长因子Ⅰ受体基因表达量(P<0.05)。本试验结果提示:ALA能降低肉鸡体重、胸肌绝对含量和抑制骨骼肌发育,但明显提高肉仔鸡肌肉抗氧化性能,并调控肌纤维类型转化,从而改善肉品质。试验二主要研究ALA对鸡胚骨骼成肌细胞增殖、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性、骨骼肌增殖与分化相关调节因子基因表达,及MyHC基因相对表达量影响。通过噻唑蓝(MTT)比色法测定发现,与对照组相比,ALA显著降低成肌细胞吸光值,且随着时间推移和浓度增加差异更显著(P<0.05)。通过细胞形态学角度看基本与MTT结果一致,另外还发现1000μmol/LALA组在处理72h后有大量细胞脱落现象发生。细胞周期测定结果可知,ALA浓度达到100μmol/L以上时就已经开始显著增加处于G1/GO期细胞数,且显著降低S期细胞数,使得细胞主要停留G1/G0期。200μmol/L ALA显著降低成肌细胞融合率。相关基因表达方面:500μmol/L ALA对增殖期成肌细胞Pax7基因表达有降低趋势(P=0.0622);200μmol/L ALA显著增加处理后期MyoD、肌细胞生长素(MyoG)和Myf5基因表达量(P<0.05),而对MyoG基因表达在处理24h是显著降低(P<0.05);随着ALA添加量增加,FWM MyHC基因mRNA相对表达量呈线性降低趋势,FRM和SM MyHC mRNA相对表达量呈线性增加趋势。另外,ALA显著抑制成肌细胞Na+-K+-ATP和Ca2+-Mg2+-ATP两种酶活性(P<0.05)。本试验结果提示:高浓度ALA抑制骨骼成肌细胞增殖,对分化影响也许是先降低后升高,并调控肌纤维类型转化。试验三主要研究ALA对缓解采食被黄曲霉毒素污染花生粕肉鸡机体损伤的机制。选取160只健康公雏,随机分配成4个处理组:对照组(Control)为基础日粮组;硫辛酸组(ALA):基础日粮中添加300mg/kg ALA;黄曲霉毒素霉变组(AFB1):用霉变花生粕替代基础日粮中正常花生粕(AFB1检测浓度是(74μg/kg));霉变+硫辛酸组(AFB1+ALA),在霉变日粮中添加300mg/kg ALA,处理时间为3周。结果显示:AFB1没有影响到肉鸡生产性能(P>0.05),而添加ALA后显著降低肉鸡ADWG;AFB1显著降低血浆中白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)含量(P<0.05),显著增加血浆中碱性磷酸酶(AKP)活性(P<0.05),添加ALA后增加了血浆中ALB和TP含量,且AKP活性被显著降低(P<0.05); AFB1显著降低肝脏中代谢酶谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活性(P<0.05),并对肝脏组织形态学造成一定损伤,添加ALA后显著改善AFB1对肝脏形态学损伤,显著增加GOT活性,对GPT有增加趋势;AFB1显著增加肉鸡肝脏中丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平(P<0.05),显著降低肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P<0.05),消耗了肝脏中GSH水平(P<0.05),添加ALA后显著抑制这些指标变化,而单独添加ALA后显著降低MDA含量和提高T-SOD、GR、GSH-Px活性与GSH水平(P<0.05);AFB1显著下调肉鸡肝脏GSH-Px基因表达量,添加ALA后其表达量得到恢复;AFB1显著上调肝脏Ⅰ相代谢酶细胞色素氧化酶(CYP1A1和CYP2H1)基因表达量(P<0.05),下调Ⅱ相酶谷胱甘肽巯基转移酶α(GSTα)基因表达量(P<0.05),对环氧化物水解酶基因表达量无影响,添加ALA后显著下调CYP1A1和CYP2H1基因表达量,对GSTα基因表达量有上调趋势;AFB1显著上调肝脏促炎性因子白介素-6(IL6)表达水平(P<0.05),添加ALA后其表达量得到抑制;AFB1显著上调肉鸡肝脏核因子-κB(NF-κB)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达量(P<0.05),对NF-κB基因表达量无影响,添加ALA后显著抑制NF-κB和iNOS蛋白表达量;AFB1显著上调肉鸡脾脏促炎性因子肿瘤坏死因子α、γ-干扰素和IL6(P<0.05)表达水平,对NF-κB和血红素氧合酶基因表达无影响,添加ALA后促炎性因子基因表达量被抑制。本试验结果提示:ALA虽然降低采食AFB1污染日粮肉鸡生产性能,但能提高肉鸡健康水平,主要体现在缓解AFB1对肝脏功能的损伤,提高肝脏抗氧化能力,改善肝脏生物转化,抑制肝脏和脾脏的炎性反应,以及降低核转录因子NF-κB蛋白表达量。
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