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本研究将反向重复的芜菁花叶病毒（TuMV）HC-Pro基因定向插入到植物表达载体pCambia1301上35S启动子下游,并以农杆菌介导的叶盘法转化烟草、拟南芥和雪菜，获得转基因植物。并对转基因烟草的抗病性进行研究。 根据已经发表的TuMV HC-Pro基因序列，设计特异性引物。通过PCR扩增获得部分正反向的HC-Pro基因片段。正向的HC-Pro基因与pGEM-T载体相连，经Xba I，Kpn I双酶切，所得基因片段插到同样酶切开的载体pCambia1301上；反向的HC-Pro基因连入pMD18-T载体，再用Xba I，Pst I双酶切切下，连接到已经插入正向的HC-Pro基因的pCambia1301载体上。鉴定筛选得到含 TuMV HC-Pro基因的反向重复植物表达载体pCambia1301-TuMV HC-Pro。三亲交配法将植物表达载体pCambia1301-TuMV HC-Pro转入根癌农杆菌EHA105菌株，得到的阳性转化子用于植物转化。 用农杆菌介导的叶盘法，将反向重复TuMV HC-Pro基因转入烟草，潮霉素抗性筛选获得转基因植株，PCR检测阳性率为93.33％。对部分烟草植株进行Southern印迹杂交和RT-PCR，结果表明TuMV HC-Pro已整合到烟草基因组。接种60株转基因烟草植株，症状观察和ELISA检测表明，转基因烟草对TuMV表现出四种不同的抗病性类型：（1）免疫型，整个植物在生长过程中无病症，ELISA反应阴性，接种后前五周生长缓慢，节间变短，第六周开始正常生长。（2）抗病型，植物接种后第三周开始发病，第五周病症最严重，第七周开始新生的叶子不发病；节间极度变短。（3）延迟发病型，比非转基因植株延迟一周发病，病症类似。（4）感病型，与非转基因植株一样接种后第三周开始发病，两者病症相似。60株转基因植株中免疫型共2株，占3.33%；抗病型共3株，占5%；延迟发病型，共13株，占21.67%；感病型共42株，占70%。 用滴花法和抽真空法将反向重复TuMV HC-Pro基因转入拟南芥，两种方法的平均转化率分别为1.15%和0.48%。潮霉素抗性筛选，共获得30株转基因植株。基因组PCR以及RT-PCR检测表明TuMV HC-Pro已整合到拟南芥基因组，并获得表达。 以雪里蕻（Brassica juncea Coss. var. multiceps Tsen et Lee）子叶、带柄子叶、子叶柄和下胚轴为外植体，在添加不同植物生长调节剂的MS培养基上进行分化培养。结果表明：在4种外植体中,带柄子叶不定芽分化能力最强。子叶和带柄子叶不定芽分化的最适培养基分别为MS+2 mg/L6-BA+0.4 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3和MS+2 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3。带柄子叶和子叶不定芽分化的最佳苗龄都为5 d。AgNO3能显著地促进带柄子叶不定芽的分化，以5 mg/L的浓度为最佳。不同基因型对带柄子叶不定芽分化影响不大，但对子叶影响较明显。不定根诱导的最佳培养基为MS+0.2 mg/L NAA。 用农杆菌介导的叶盘法，将反向重复TuMV HC-Pro基因转化雪里蕻，初步构建雪里蕻的遗传转化体系。本论文研究了外植体类型、农杆菌侵染浓度和时间，预培养、共培养和预筛选时间，以及筛选和抑菌抗生素的浓度等对雪里蕻转化效率的影响。结果表明：5 d苗龄的带柄子叶，15 min农杆菌侵染时间，OD600值0.6的侵染浓度，3 d的共培养和预筛选时间，15 mg/L Hyg筛选浓度，400 mg/L Car的抑菌浓度，添加活性碳以及150?g/L AS等条件可提高雪里蕻转化频率。PCR检测，只有1株抗性植株能扩增出500bp大小的条带，与预期转入的HC-Pro基因大小相吻合。