鹿流行性出血病病毒VP7蛋白基因表达及其检测方法的建立

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鹿流行性出血病病毒(EHDV)是呼肠孤病毒科环状病毒属的成员。EHD流行期时,白尾鹿的死亡率很高,而在黑尾鹿、糜鹿和叉角羚羊中观察到EHDV。在日本已从牛体内分离到EHDV,而且一些非洲国家曾爆发生和绵羊的EHDV疫情。用实验方法人工感染EHDV的绵羊具有低水平的病毒血症,但不表现EHD的临床症状.鹿感染EHD的特点在于心脏充血,鼻腔和口腔粘膜出血,牙龈和蹄冠组织经常性糜烂。EHDV的强毒株可在1至3天内致死受感染动物,但大多数情况下,受感染的动物仅在几周内不时出现食欲减退和瘸行的症状。白尾鹿的发病率和死亡率高达90%。然而,疫病的严重程度每年不同,发病的地理位置也各年不同。EHDV影响着许多国家的畜牧业和国际贸易的发展。我国尚未有鹿流行性出血病毒感染的报道,尚属外来病。 本文综述了EHDV的最新研究进展,包括病原学、地理分布、流行病学、临床症状、病理变化、诊断方法和处理措施。 本研究以EHDV VP7基因为研究对象,成功构建VP7基因pBAD-EHDV VP7表达载体。将表达载体转入大肠杆菌,用L-阿拉伯糖诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Westem blotting分析,结果表明成功表达了重组VP7蛋白,表达产物分子量与预期的大小54.08kDa相符。用纯化的该重组蛋白为包被抗原,建立了检测EHDV抗体的间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA):用TaqMan水解探针法建立了检测VP7基因的TaqMan荧光定量RT-PCR方法;用环介导等温扩增技术建立了检测VP7基因的RT-LAMP方法,通过对引物序列的对比分析,证实设计的引物仅对EHDV有特异性反应。为我国研究鹿流行性出血病提供了技术储备,对防止该病传入我国具有重要的现实意义。
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