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分子诊断效果精确、快速而且简便,是传统的临床、组织病理和流行病学等诊断方法不能相比的。目前除核酸探针、PCR技术等技术外,生物芯片、分子烙印技术以及生物传感器等生命科学领域中的一些高技术也正在被开发应用于分子诊断领域,本研究对生物传感器和生物芯片技术进行了初步探索。
将靶标分子通过物理吸附或化学方法固定在某种固体材料上是制备生物芯片和生物传感器的核心步骤,是制备高质量蛋白质芯片的关键问题。本实验通过对PMMA表面进行化学处理,然后用于蛋白分子的固定。结果表明处理后的PMMA不仅能固定蛋白质分子,而且固定后的蛋白质分子能保持活性,实验获得了良好的效果。结果还证明其固定蛋白分子效果还明显优于目前比较常用的醛基化玻片,说明有机玻璃这种可塑性很强的材料也用来固定蛋白分子,经进一步的实验测试有可能为蛋白质芯片研制提供新的优良的基片材料。
电化学免疫传感器在检测方面具有经济、灵敏度高、方法简单、快速、操作简便等诸多优点。电化学免疫传感器主要由生物分子识别和信息转换部件两部分组合构成。研制生物传感器的前提或核心问题是如何制备稳定的生物传感器的信息转换部件即工作电极。本研究探索两种方法制备传感器的工作电极,并以此为基础建立电化学免疫传感器系统。
方法一:参考前人非金属化学镀方法,在施镀过程中通过对一些实验条件进行优化和改进,成功的在了PMMA和石墨两种材料上进行了镀镍和镀金,并用这些材料制作了传感器的工作电极。方法二通过电化学方法,在铂片表面快速电沉积聚苯胺膜,制作成工作电极。
实验用镀金电极进行了分子自组装和连接,结果发现该电极不能耐受酸性环境,同时碱处理又不能活化该电极表面活性位点,而且其本身电化学特性很不稳定。因此镀金膜电极作为传感器工作电极的免疫传感器系统的建立还需要进一步的探讨和研究。
在铂基聚苯胺膜上固定抗体,并用辣根过氧化物酶标记的二抗与一抗结合,制成免疫工作电极。使用该电极建立电化学免疫传感器检测系统进行免疫电化学测试实验,经过连续和稳定性测试,结果证明该工作电极表现出良好的电化学活性。以聚苯胺修饰的铂电极为工作电极建立起来的传感器测试系统具有良好的检测性能,其稳定性好、敏感性高、检测快速,可重复使用、连续使用,经进一步的研究,有可能将其开发成一种快速、准确、高灵度的临床检测方法。