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目的探讨线粒体DNA(mtDNA)D-Loop区序列分析结合临床病理因素判断多结节性肝细胞性肝癌(肝癌,HCC)细胞克隆起源的可行性。方法分组:实验组为多结节肝癌组,来自广西医科大学第一附属医院肝胆外科2004年4月至2007年8月连续收治的42例共112个结节HCC的根治性手术切除肿瘤组织;对照组来自同期单结节HCC手术切除组织共20例40个样本,分两个亚组,对照组Ⅰ为16例单结节肝癌的2块不相邻的癌组织;对照组Ⅱ为4例伴有肉眼门静脉癌栓的肝癌患者,各取癌和癌栓1块。正常对照组来自同期肝移植供肝或肝外伤切除组织共5例。用PCR结合直接测序的方法检测各样本组织mtDNA D-Loop区的序列,并分析各例癌结节中序列异同情况。同时对相关的临床病理资料进行统计学处理。结果实验组中有20例各结节的mtDNA D-Loop区序列存在差异,可能为多中心(MO)起源,22例各结节的mtDNA D-Loop区序列完全相同,可能为单中心(即肝内转移,IM)起源;对照组20例中各样本的mtDNA D-Loop区序列完全相同,为相同细胞克隆起源。HBeAg(P=0.008)、肿瘤大小(肿瘤直径之和)(P=0.029)、肿瘤分布(位置)(P=0.041)、肝硬化(P=0.011)、门静脉及镜下癌栓(P=0.023)、主瘤的病理分化程度(Edmondson病理分级)(P=0.026)等是区分多结节性肝癌细胞克隆起源的重要指标;HBeAg(+)、肿瘤直径之和≤7cm、肿瘤结节分别位于不同半肝、肝硬化、门静脉及镜下无癌栓和/或主瘤的病理分化程度为高、中分化者,MO发生的机率高。MO组无瘤生存时间(20.7±4.5个月)明显长于IM组的无瘤生存时间(6.3±1.3个月,P=0.022);MO组生存时间(29.1±4.4个月)明显长于IM组的生存时间(10.1±1.5个月,P=0.006)。在多因素分析中,IM/MO是无瘤生存时间(P=0.012)和生存时间(P=0.011)的独立影响因素。结论1.在多结节性肝癌发生中,存在单中心性和多中心性两种不同的起源方式。mtDNA D-Loop区序列具有较高的变异率,应用PCR结合直接测序的方法检测该区序列并比较各个癌结节的DNA序列异同,可以快速、简单、有效地为区分IM和MO起源提供参考。2.HBeAg、肿瘤大小(肿瘤直径之和)、肿瘤分布(位置)、肝硬化、门静脉及镜下癌栓、主瘤的病理分化程度等是协助鉴别IM和MO起源的重要指标;HBeAg(+)、肿瘤直径之和≤7cm、肿瘤结节分别位于不同半肝、肝硬化、门静脉及镜下无癌栓和/或主瘤的病理分化程度为高、中分化者,MO发生的机率高。3.多中心性来源的肝癌疗效及预后较好。