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由结核分枝杆菌感染引起的结核病仍然是世界范围内高发的感染性疾病之一,增加了全球公共卫生负担。卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)预防效果有限,研发新型结核疫苗为预防控制结核病的关键。研究发现,在结核分枝杆菌休眠期,由休眠生存调节子(dormancy survival regulon,DosR)编码的调控蛋白Rv2029c具有成为新型结核疫苗相关抗原的的潜能,而其引起的免疫应答及相关应答机制尚未完全阐明。目的:探索DosR抗原Rv2029c在先天性和适应性免疫应答中的作用及其相关机制。方法:(1)利用基因工程技术获取重组蛋白Rv2029c(rRv2029c),用rRv2029c刺激C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞和THP-1细胞。通过Western Blot技术检测小鼠巨噬细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)的表达和核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的磷酸化,利用流式细胞术检测巨噬细胞表面共刺激分子CD80、CD86和CD40的表达,初步探究Rv2029c在巨噬细胞活化中的作用。(2)用rRv2029c刺激C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞和THP-1细胞,通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况,qRT-PCR法检测巨噬细胞caspase-8、caspase-3、Bax和Bcl-2在mRNA水平的相对表达,初步探究Rv2029c在细胞凋亡中的作用。(3)用rRv2029c在0、2、4周免疫C57BL/6小鼠,末次免疫3周后经鼻感染5×10~8 CFU BCG,感染3周后制作肺组织病理切片评估小鼠肺部炎性损伤;流式细胞术检测小鼠肺脏,淋巴结,脾脏CD4~+T细胞、CD8~+T细胞干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的表达,初步评价Rv2029c在体内引起适应性免疫应答中的保护作用。结果:(1)与对照组相比,100 ng/mL、500 ng/mL和1000 ng/mL rRv2029c作用下,小鼠巨噬细胞TLR2表达增加(P<0.01);100 ng/mL rRv2029c作用下,NF-κB(p-p65)表达量增加(P<0.05)。与对照组相比,小鼠巨噬细胞表面共刺激分子CD40、CD80表达增加(P<0.05);与对照组相比,THP-1细胞在MHC-II分子高表达的基础上,100 ng/mL、500 ng/mL和1000 ng/mL rRv2029c作用下CD40、CD80和CD86表达增加(P<0.05)。(2)rRv2029c作用小鼠巨噬细胞12h、24 h后,与对照组相比,小鼠巨噬细胞凋亡率均增加(P<0.05);100 ng/mL rRv2029c作用THP-1细胞6 h、24 h后,与对照组相比,THP-1细胞凋亡率均增加(P<0.05),凋亡相关基因caspase-8、caspase-3和Bax在mRNA水平的相对表达不同水平增加,Bcl-2相对表达减少(P<0.05)。(3)与对照组相比,rRv2029c免疫小鼠肺部炎症减轻,肺部、淋巴结、脾脏组织CD4~+T细胞和CD8~+T细胞IL-4表达降低(P<0.05),淋巴结CD8~+T细胞、脾脏CD4~+T细胞和CD8~+T细胞TGF-β表达增加(P<0.05))。结论:DosR抗原Rv2029c可发挥免疫保护作用,其可能的作用途径包括对巨噬细胞的激活,诱导巨噬细胞凋亡以及平衡Th1/Th2细胞免疫应答。