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目的:本研究旨在探索浆细胞样树突状细胞都通过何种机制参与系统性红斑狼疮的发病。方法:1.通过抗BDCA-4磁珠分选人外周血pDC,分别对其进行TLR7及TLR9刺激,通过ELISA方法观察期IFNα、IL-6、TNFα及IFNβ水平2.通过DAVID及IPA对pDC激活后的miRNA及mRNA表达谱进行生物信息学分析以寻找与pDC激活相关miRNA。3.应用体外转染的方法进一步测试这些激活变化的miRNA如何影响pDC产生IFNα。4.通过梯度密度离心富集加流式细胞仪分选的方法分离小鼠pDC,观察miRNA敲除后小鼠pDC功能的变化,应用流式细胞学技术观察miRNA敲除后对pDC数量的影响。5.为进一步了解pDC在SLE发病的作用,分离7种品系自发SLE小鼠模型包括NZB、NZW、NZB/W F1、NZM2410、MRL-lpr,B6.NZMSle1/2/3及BXSB/Mp小鼠,对照选取MRL/Mp,BXSB.B6-Yaa、Balb/c、C57BL/6小鼠,分离脾脏、骨髓、胸腺和外周淋巴结细胞,应用流式细胞仪检测其pDC在免疫器官中的比例和总数。比较在自发SLE小鼠和对照小鼠pDC表型的差异。比较SLE小鼠pDC对TLR7/9刺激反应明确其pDC是否存在功能异常。结果:1.人类pDC在接受R837刺激后产生IFNα水平具有性别差异,而这一现象在ODN2216刺激后无,并且TNFα、IL-6及IFNβ在TLR/9刺激条件下均无性别差异。2.对miRNA及mRNA的表达谱分析后发现,性别差异的IFNα水平并不是来源于mRNA水平及miRNA。3.在研究miRNA在小鼠pDC激活后变化的情况发现存在巨大物种差异,因此人类中筛选出来的miRNA无法对应到小鼠研究。4.我们测试了miR-21、miR-146a、miR-150及miR-155KO小鼠的pDC功能和数量发现,miR-21 KO小鼠对ODN2216应答弱于C57BL/6小鼠是因为其pDC数量下降。miR-150 KO小鼠对ODN2216应答增强由于其pDC功能增强。miR-155 KO小鼠pDC数量有下降但是未达到统计学差异。5.对于SLE小鼠模型研究发现,所有检测小鼠中骨髓pDC占百分比均最高,统计小鼠股骨和胫骨pDC数量和脾脏pDC数量接近,考虑骨髓还分布于其他长骨与扁平骨,因此骨髓pDC数量最多。自发SLE小鼠NZB/W F1和NZB小鼠的脾脏和骨髓pDC数量较C57BL/6小鼠明显增多,MRL-lpr,NZM2410及NZW小鼠脾脏pDC数量较C57BL/6增多。NZM2410,NZW及Balb/c小鼠淋巴结pDC百分比多于C57BL/6小鼠,但由于难以统计整个小鼠淋巴结总数,因此推测淋巴结pDC数量在这3个品系增高。胸腺pDC在所有小鼠中百分比均较低,NZB,B6.NZMSle1/2/3小鼠胸腺pDC小于C57BL/小鼠,NZM2410胸腺较小,因此总数也小于C57BL/6L小鼠。NZW胸腺pDC总数高于C57BL/6。其他小鼠胸腺pDC与C57BL/6小鼠无统计学差异。B6.NZMSle1/2/3小鼠骨髓pDC数量略低于C57BL/6,BXSB/Mp脾脏与骨髓的pDC与C57BL/6小鼠无统计学差异。MRL-lpr与MRL/Mp小鼠pDC数量无差异,提示lrp突变不影响pDC数量。BXSB.B6-Yaa的pDC表型与BXSB/Mp类似,提示Yaa突变也不影响pDC数量。6.对比C57BL/6小鼠脾脏、胸腺、外周淋巴结及骨髓pDC对TLR7和TLR9刺激结果提示骨髓pDC能产生很高的IFNα,而脾脏、胸腺、外周淋巴结产生IFNα能力相似。7.在上面结果的基础上进一步对比各品系之间脾脏和骨髓pDC对TLR7和TLR9刺激应答情况发现,NZB、NZB/W F1及NZM2410小鼠脾脏pDC在应用ODN2216刺激后产生IFNα高于C57BL/6,其余品系与C57BL/6相似。NZB骨髓pDC对ODN2216有较强的应答,B6.NZMSle1/2/3则弱于C57BL/6小鼠。其余小鼠骨髓pDC结果与C57BL/6类似。应用Poly U对TLR7刺激后品系间差异主要表现在脾脏,NZB/W F1,NZB和MRL-lpr小鼠较C57BL/6小鼠产生更多IFNα而骨髓各品系与C57BL/6比较无统计学差异。结论:1.TLR7L诱导人类pDC产生干扰素具有性别差异。这种性别差异并非来源于miRNA的差异表达。2.人类pDC激活变化的miRNA在小鼠pDC激活后中未发生改变。3.敲除miR-21及miR-150会影响其数量或功能。4.不同品系的SLE小鼠pDC功能和数量存在差异,提示不同SLE发病机制中pDC参与发病的角色不同。