江苏部分地区猪源沙门菌的分离鉴定及相关生物学特性研究

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沙门菌能广泛感染包括人在内的多种动物,是现在具有重要公共卫生学意义的人畜共患病病原之一。人能够通过食入沙门菌污染的食品感染沙门菌。沙门菌曾在国内外多次引起重大食物中毒事件。在中国,猪肉长期占据肉类消费第一位,因此,猪沙门菌的研究对养猪业和食品安全具有十分重要的意义。本研究旨在调查部分地区猪沙门菌的携带及致病情况,为大规模的流行病学调查提供资料。本文共涉及2014年从扬州某屠宰场和扬州大学动物医院共采集样品527份,分离出沙门菌42株。所有分离株生化试验结果显示均符合沙门菌的生化特性,但多数分离株(24/42)与丙二酸盐呈阳性反应,不符合典型的沙门菌生化反应;并有少数分离株不产硫化氢,赖氨酸脱羧酶试验结果阴性,生化反应结果典型的沙门菌分离株仅占19.05%(8/42),显示出本次实验分离株与常见致病性菌株在生化特性方面的差异。所有分离株进行血清型鉴定,共有28株分离株能够根据抗原式确定菌名,其中比例最高的是列克星敦沙门菌(52.38%),其抗原式为10:Z10:1,5,其次为仅测出O抗原为02的分离株,共10株(23.81%),其余血清型的分离株为单个或两个的散在分布。所有分离株中常见的对猪致病的沙门菌仅有鼠伤寒沙门菌一株,其余分离株在一般情况下均为在健康猪体内携带但不致病,部分菌株可对其他宿主致病。根据对细菌类型和不同类别抗菌药和临床用药情况选择了羧苄西林、阿莫西林、头孢唑林、头孢噻肟、痢特灵、卡那霉素、庆大霉素、链霉素、丁胺卡那霉素、四环素、复方新诺明、环丙沙星、恩诺沙星、萘啶酸、氯霉素、多粘菌素B、氟苯尼考、氨苄青霉素、先锋Ⅳ、左旋氧氟沙星等20种抗生素的药敏试验,这些抗生素均是针对革兰氏阴性菌的药物。结果显示,分离株的耐药情况非常普遍,在所选择的抗生素中,共有14种的抗菌药耐药率在50%以上,其中对氨苄青霉素抗性为100%,对四环素和复方新诺明的耐药率也达到90%以上,并且分离株表现出来的耐药表型与国内外相关报道一致。同时,绝大多数分离株(39/42)还表现出多重耐药性,最高可达14重耐药,其中13重耐药最多,占52.38%(22/42),10重以上耐药率达到73.81%(31/42),分离株的耐药情况非常严重。针对所有分离株进行遗传相关性和致病性的研究,首先确定相同抗原式的不同分离株的遗传相关性。通过对分离株进行其毒力岛的核心蛋白基因扩增和脉冲场凝胶电泳,发现相同抗原式的不同分离株,其毒力岛分布完全相同,PFGE条带相似度在95%以上,表明相同血清型不同分离株之间同源性高,其生物学特性及致病性一致,可用单个分离株代表同种血清型的分离株,可取代各血清型代表菌株作为致病性实验的受试菌株。选取有代表性的分离株以108CFU的剂量腹腔注射攻毒6-8周龄昆明系小鼠,结果只有鼠伤寒分离株攻毒小鼠出现死亡,其余分离株攻毒后均未表现出对小鼠的致死性。通过LDso的测定和细菌体内动态分布实验,比较鼠伤寒沙门菌分离株与猪霍乱沙门菌标准株的致病性差别,发现鼠伤寒沙门菌的致死剂量较猪霍乱沙门菌高近200倍,但是细菌进入小鼠体内后增殖和转移速度远比猪霍乱沙门菌标准株快,在进入体内的6h即可达到高峰,之后逐渐降低。鼠伤寒沙门菌分离株能够导致小鼠在攻毒后一周内急性死亡,但病程短,耐过小鼠表现正常。猪霍乱标准株致病性高但致死速度慢,病程长,耐过小鼠仍可长期带菌,攻毒后一个月在肠道及粪便内仍可检测到攻毒细菌存在,有继续传播的风险。
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