清肺通络膏对流感病毒诱导的大鼠幼龄肺组组ERK/NF-κB信号通路的影响

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目的:建立IV(FM1株)感染的大鼠幼龄急性肺损伤模型;应用清肺通络膏外用贴敷干预,通过免疫组化法和Western blot法检测肺组织中p-ERK、t-ERK、NF-κB p65蛋白表达水平,研究和探讨IV感染后,清肺通络膏对IV诱导的肺炎大鼠肺组织中ERK/NF-κBp65信号通路的调控机制。材料与方法:1.经鼻腔接种LD50浓度的甲型流感病毒FM1株方法,建立Wistar大鼠幼龄感染流感病毒的急性肺损伤模型,通过每天观察大鼠一般状态(饮食量、进水量、毛发、活动量、精神状态、体重、呼吸频率),肉眼观察肺组织大体外观,光学显微镜下肺组织病理学观察,对肺组织进行病理评分等多个角度对IV病毒性肺炎进行鉴定模型。2.采用高、中、低剂量的清肺通络膏贴敷于大鼠幼龄背部做为给药途径,对IV诱导的大鼠肺炎模型进行干预,通过观察记录Wistar大鼠一般状态,肺组织病理切片、和肺脏组织病理评分、计算肺指数,探讨清肺通络膏的高剂量组、中剂量组、低剂量组,对流感病毒感染性肺炎治疗情况进行比较研究。3.采用免疫组化法和Western blot法检测清肺通络膏各治疗组Wistar大鼠幼龄肺组织中p-ERK、t-ERK、NF-κB p65蛋白表达水平,探讨清肺通络膏治疗IV诱导的急性肺炎的治疗作用机制和剂量关系。结果:1.IV感染的Wistar大鼠幼龄模型鉴定结果:模型对照组在造模后精神状态不佳,消瘦,体重增长缓慢,进食和饮水量都明显减少,体重下降,全身毛发耸立无光泽,蜷缩,弓背,反应迟钝,行动缓慢,活动量明显减少,呼吸频率增快,肺组织外观颜色深红,肺间质严重充血水肿,与正常对照组相比肺组织重量偏重,病理染色观察可见肺泡上皮细胞受损脱落,肺间质和血管周围充血水肿增厚,肺泡内大量炎症细胞渗出。2.大鼠体重和肺指数比较:模型组大鼠的体重增长最慢,清肺通络膏治疗组体重有所增长,以高剂量组增长最快,都与正常组有明显差异(p<0.05);与模型组比较,其他各组大鼠肺指数均显著下降(p<0.05);中、低剂量组肺指数相比高剂量组下降的不明显。3.与正常对照组相比,模型组和治疗组在肺泡、气管、毛细血管周围炎症的损伤范围的比例,炎症渗出量的评分都有显著性差异(p<0.05);高、中剂量组病理评分显著小于低剂量组,与模型组有显著差异(p<0.05)。中剂量组与低剂量组的肺组织病理学评分有显著差异(p<0.05)。低剂量组在支气管及周围、肺泡局部的病理评分与模型组无差异(p>0.05)。提示清肺通络膏能减轻IV诱导的肺组织病理损伤,并且剂量的高低对治疗效果有影响,以高剂量组治疗效果最明显。4.与正常对照组比较,模型组和治疗组中肺组织p-ERK、NF-κB p65蛋白表达有明显差异(p<0.05);在肺组织p-ERK蛋白表达水平,清肺通络膏治疗组与模型组有显著差异(p<0.05)高剂量组优于中、低剂量组;在肺组织NF-κB p65蛋白表达水平,高剂量组和中剂量组显著低于模型组(p<0.05),与低剂量组有显著性差异(p<0.05);低剂量组肺组织中NF-κB p65蛋白表达与模型组无差异(p>0.05)。5.模型组大鼠肺组织中ERK蛋白磷酸化水平与正常组相比显著增高(p<0.05);清肺通络膏的高、中、低剂量组ERK蛋白磷酸化水平明显被抑制,与模型组有显著性差异(p<0.05),中剂量组ERK蛋白磷酸化水平与高剂量组差异明显(p<0.05),而与低剂量组有明显差异(p<0.05)。提示清肺通络膏能抑制大鼠肺组织ERK蛋白的活化,从而降低肺组织内炎症。6.采用单因素分析法,结果显示模型组的p-ERK、NF-κB p65蛋白表达水平最高,与其他各组存在显著性差异(p<0.05),高剂量组的p-ERK、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低,与中、低剂量组有明显差异(p<0.05)。中剂量组的NF-κB p65蛋白表达水平与低剂量组有明显差异。结论:1、经鼻腔接种流感病毒FM1株的方法,诱导大鼠幼龄肺炎模型,通过观察大鼠一般状态、光镜下观察大鼠肺组织病理变化、计算肺指数的方法,成功鉴定了IV诱导的大鼠肺炎模型。2、高、中、低剂量的清肺通络膏能够下调IV肺炎大鼠肺组织中的ERK、NF-κBp65蛋白表达水平。3、清肺通络膏能够通过抑制ERK/NF-κB信号通路的活化,减少病毒增值复制、改善IV引起的大鼠肺组织炎症病理损伤,从而发挥抗病毒作用。并且剂量的高低对治疗效果有影响,以高剂量组治疗效果最明显。4.清肺通络膏能够治疗IV肺炎的药理机制可能与其抑制ERK/NF-κB信号通路作用有关。
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