半夏的种质资源鉴定研究及加工方法对其品质的影响

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半夏,为天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.的干燥块茎,具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等功效。据统计在558种中药处方中,半夏的使用频率居第22位。其药理作用广泛,是一味重要的中药。但半夏各成分含量较低,有效成分不明确,对于半夏因加工处理方法不同引起的质量上的巨大差异一直没有引起足够的注意,长期以来半夏加工没有科学统一的标准,又由于种质资源、产地、采收时间的不同,半夏药材的品质存在很大差异,严重影响其临床疗效。本文以从各地收集的干、鲜品半夏作为研究对象,分别采用等电聚焦电泳法、气相色谱法、反相高效液相色谱法对这些样品进行测定分析,探索半夏种质资源鉴定方法及不同加工处理方法对其化学成分的影响,为半夏种质资源鉴定和质量标准研究奠定基础。本文对不同产地、不同成熟期和发芽期的半夏种质材料进行蛋白质等电聚焦电泳比较分析。该技术是通过加入两性电解质,形成较平滑pH梯度,使样品蛋白质在等电点处停止电泳。含有不同蛋白质成分的各种中药材可应用等电聚焦电泳技术对其进行质量分析与鉴定。为减少昂贵的试剂用量并用普通的电泳设备即可完成等电聚焦电泳,我们应用了改进的等电聚焦技术,效果好,重现性好。实验结果表明:虽然不同地区的半夏处于成熟期时其蛋白质IEF电泳谱是相同的,但处于发芽期的不同地区半夏的种植资源的IEF蛋白质电泳谱有显著区别;同一地区(如荆州野生半夏)发芽期的每一粒半夏块茎的IEF蛋白质电泳谱是相同的。因此,我们可以考虑用发芽期的半夏来鉴别不同地区或不同种质资源的半夏品种。本文采用气相色谱法,对各个地区用不同方法加工的各种半夏样品中所含的甾醇类成分进行了分析测定,结果表明:经70℃烘2h再以低温烘干的全部鄂西半夏样品,其所含的5个特有的甾醇类成分非常丰富和稳定,且每个样品中5个成分色谱峰的相似度很高。而未经适当高温处理、烘干的半夏样品,或直接自然晒干的半夏样品,均未检测到应有峰高的甾醇类成分或几乎难以检出相应的成分。我们对处于发芽期的半夏样品也进行了测试,完全没检测到半夏中特有的甾醇类成分。我们分析,半夏中的一些酶参与了半夏中甾醇类成分的代谢,发芽期时,酶特别活跃,物质代谢迅速,所以难以检出甾醇类成分。低温烘干和直接晒干的半夏药材,其所含的多酚氧化酶类等未被破坏,只是因干燥过程抑制了部分活性,一旦温度升高、空气变潮,其所含的酶就开始活跃。未经适当高温处理杀酶的半夏,在多酚氧化酶的作用下,会发生褐变甚至腐烂。有些人为防止这种现象,在半夏中常加入了一种名为焦亚硫酸钠的防腐剂(一种容易引起癌症的物质),严重影响了半夏药材的质量。本文采用药典常规方法对其进行检视,结果发现:有些半夏样品中确实含有焦亚硫酸钠。低温烘干和直接晒干的半夏药材成分容易改变、极易腐烂,其原因与所含多酚氧化酶破坏有关。本文的研究结果揭示,半夏的加工方法对其品质和储藏有着极为密切的关系。对上述分析结果,本文还通过对半夏中水溶性成分的分析进行了证实。采用反相高效液相色谱法,以甲醇-水系统为流动相,检测波长268nm,柱温30℃,流速1.0mL·min-1,对不同方法加工的半夏样品进行了检测。实验结果表明:未经适当高温杀酶处理的半夏及处于发芽期的鲜品半夏与经70℃烘2h再以低温烘干的半夏及刚刚采挖的鲜品半夏相比较,其水溶性化学成分明显减少。并且当有正确样品和对照品时,还可以用本文建立的HPLC色谱法对半夏水溶性指纹图谱作进一步分析研究。最后,采用阈下和阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠法,考察了经适当高温处理的鄂西半夏的镇静活性的强度与活性部位。结果表明:半夏醇提物乙酸乙酯部位与总的醇提物及醇提物的正丁醇部位相比,具有更强的镇静催眠效果,半夏镇静催眠的有效成分应存在于其醇提物乙酸乙酯部位中。
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