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细菌(尤其是厌氧菌)在口腔疾病中占有重要地位，已有不少学者建议将某些细菌作为口腔疾病的常规检查和诊断指标。但传统的检测方法往往难以作出明确鉴定。本研究旨在以牙龈卟啉菌(Pg)作为研究对象，利用分子生物学技术探索最新的细菌学鉴定方法，为基础研究和临床应用提供依据。 1 利用PCR技术获取Pg特异基因片段并进行鉴定 1．1 成功地获得了Pg特异基因片段 根据Dickinson(1988)发表的特异Pg菌毛亚单位蛋白基因(fimA)序列设计一对引物，扩增片段位于该基因中5′端504～1045bp，总长度为542bp。以国际标准菌株Pg381 DNA作为扩增模板；含Pg fimA基因的重组质粒pUC13Bg12.1作为阳性对照模板；含Aa基因的重组质粒pAA2097作为阴性对照模板，按94℃变性30s、55℃退火1min、72℃延伸1min为—个周期，共循环35次后进行电泳分离，紫外光下观察扩增产物。 结果显示：以pUC13Bg12.1质粒和Pg381 DNA为模板的反应管中均扩增出一条清晰明亮的特异DNA片段，与参照物对比，片段大小与预计的一致，未见非特异扩增产物。而不加引物或模板以及以Aa pAA2097质粒为模板的对照管中均无扩增产物出现。初步说明我们已成功地获得了Pg特异DNA片段，从而提供了—个无需分子克隆就可获得大量辱寺屏DNA片段的手段，为进—步研究奠定了基础。 1．2 扩增产物的特异性、敏感性鉴定