鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）和番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus，MDPV）是动物病毒中最小的一类单链DNA病毒，属细小病毒科细小病毒属，临床上以腹泻、渗出性肠炎等为主要临床症状，表现较高的发病率和死亡率，严重危害水禽养殖业的发展。通过对水禽细小病毒VP3蛋白抗原表位的鉴定及其重组腺病毒载体的构建，为GPV和MDPV新疫苗的研发和治疗提供新的参考。抗原表位对免疫治疗试剂和疫苗的设计等有重要意义。本研究利用噬菌体展示技术对纯化后的GPV VP3蛋白单克隆抗体4A2进行3轮淘选，在第3轮的淘选中随机挑选8个克隆进行DNA测序，通过对序列的分析，发现获得一致序列DYRFHH。与VP3蛋白氨基酸序列对比后，发现该序列与第65⁸8位的氨基酸有很高的同源性，确定该表位为⁶⁵DYRFHH⁸⁸。为进一步验证该序列是否为一抗原表位，以噬菌体为包被抗原，做ELISA检测，结果表示DYRFHH可以被单抗4A2特异性识别，证实⁶⁵DYRFHH⁸⁸为一构象表位。VP3蛋白抗原表位的精确鉴定，可以帮助了解其抗原结构与功能的关系，并为GPV和MDPV亚单位疫苗的设计和检测方法的建立提供依据。VP3蛋白是水禽细小病毒的结构蛋白，内含GPV主要抗原决定簇成分，是主要免疫保护性抗原，能诱导机体产生具有中和作用的抗体。根据GPV和MDPV VP3蛋白的基因序列分别设计合成两对引物，扩增VP3基因，并利用腺病毒重组技术将水禽细小病毒VP3基因克隆到pShuttle-CMV转移载体上，将重组转移载体经PmeⅠ酶切线性化后电转入BJ5183感受态菌种与腺病毒骨架载体pAdEasy-1进行菌内同源重组。重组的质粒经PacⅠ酶切，分别得到30kb大片段和3kb及4.5kb小片段的重组质粒即为阳性质粒。将鉴定为阳性的重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染到HEK-293细胞中，待10d左右细胞出现病变后，收毒传代，进行PCR和间接免疫荧光鉴定，鉴定结果表明，实验成功构建了表达VP3基因的重组腺病毒rAd-GPV-VP3和rAd-MDPV-VP3，为水禽细小病毒新型疫苗的研究提供了一个新的思路。