桑叶抑菌成分的提取分离及其分析

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本课题以桑叶为原料,对其进行抑菌有效成分的提取及分离,并对分离后的产物进行成分鉴定,全文分为提取工艺的研究、有效抑菌组分的富集及抑菌效果评价、有效成分的分离及其分析三个部分。在提取工艺研究中,通过提取率的比对、抑菌效果的评价和总黄酮含量的测定,对热水浸提法、乙醇提取法和水提-醇萃法进行研究,选取最佳提取法为乙醇提取法;在此基础上,对乙醇提取法的提取工艺进行单因素和正交试验优化,采用滤纸片法,以金黄色葡萄球菌(Sa.)和大肠杆菌(Ec.)为指示菌,以抑菌圈直径为评价指标,得出影响因素强弱为提取温度>乙醇浓度>提取时间>固液比,最佳提取工艺为:提取温度70℃,乙醇浓度70 %,提取时间4 h,固液比1 : 30。将桑叶粉末在最佳提取工艺下提取,所得醇提物,按照极性大小,依次采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,对萃取所得石油醚组分、二氯甲烷组分、乙酸乙酯组分、正丁醇组分和水组分进行滤纸片法试验、MIC值测定和总黄酮含量测定,最终得出抑菌效果比对结果和总黄酮含量测定结果均为:乙酸乙酯部>二氯甲烷部>石油醚部>正丁醇部;各组分对Sa.的抑菌效果优于对Ec.的抑菌效果;其中最佳抑菌组分乙酸乙酯萃取部分对于Sa.的MIC值为0.625 mg/mL,对于Ec.的MIC值为1.25 mg/mL,其总黄酮含量为72.44 mg/g。对乙酸乙酯部位进行抗菌谱考察,发现其对于沙门氏菌的抑菌效果最佳,其次为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,对于啤酒酵母菌有较弱的抑菌活性,对于枯草芽孢菌和黑曲霉菌几乎无抑菌活性。对该部分进行稳定性考察发现,在一定范围其具有较好的热稳定、抗酸碱度稳定性和紫外线照射稳定性。将乙酸乙酯萃取物添加到膏霜和洗衣液中,对其防腐效果进行考察得出,当乙酸乙酯部分在洗衣液中加入量为1.0 %和在膏霜中加入量为1.2 %时,30周内菌落检出为0。对桑叶提取物水解后进行HPLC分析,测定其中游离槲皮素的含量为:0.5162 mg/g,山奈酚的含量为0.2463 mg/g。对乙酸乙酯部位进行试剂反应和薄层色谱分析,初步鉴定抑菌有效组分为黄酮类化合物。用聚酰胺层析柱对乙酸乙酯萃取部分进行分离,以不同浓度乙醇进行洗脱,采用抑菌圈法对洗脱液进行跟踪鉴定,选取95 %的乙醇洗脱组分为最佳抑菌组分,二次上样富集,洗脱后,测定总黄酮含量为乙酸乙酯萃取物中总黄酮含量的3.6倍。将富集后的洗脱组分上硅胶层析柱,洗脱后测定得IV组分为最佳抑菌组分。对IV组分进行HPLC、UV和LC-MS分析,最终得出有效抑菌组组分中含有桑色素和少量芸香苷和山奈酚。
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