华蟾素抑制TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞上皮-间质化的实验研究

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目的:1、研究中成药华蟾素注射液是否能够影响TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞的上皮-间质化过程。2、研究华蟾素对TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响。方法:1、将体外培养的人结肠癌SW480细胞分为:空白对照组; TGF-β1单独诱导组,TGF-β1剂量为10ng/ml;不同剂量华蟾素干预组(分别选择2.5、5、10、20、40、80mg/ml剂量华蟾素与TGF-β1共培养),且TGF-β1剂量均为10ng/ml。体外培养48小时。2、利用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化。3、CCK8检测各组细胞增殖情况。4、Transwell小室实验检测空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组的细胞侵袭与迁移能力变化。5、QRT-PCR和Western blot分别检测空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的mRNA及蛋白水平。结果:1、倒置相差显微镜观察结果表明,与空白对照组相比,TGF-β1单独诱导组、2.5mg/ml剂量华蟾素干预组SW480细胞呈现典型的间质化表型,5、10、20、40、80mg/ml剂量华蟾素干预组细胞均显示出典型的上皮表型。2、CCK8结果显示,与空白对照组相比,TGF-β1单独诱导组SW480细胞增殖活力未发生明显变化(P>0.05),与TGF-β1单独诱导组比较,2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组细胞增殖活力未发生明显变化(P>0.05),10、20、40、80mg/ml剂量华蟾素干预组细胞增殖活力均受到显著抑制(P<0.05)。3、Transwell小室实验结果表明,与空白对照组相比较,TGF-β1单独诱导组侵袭及迁移能力均明显增强(P<0.01),与TGF-β1单独诱导组比较,2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组侵袭和迁移能力均明显减弱(P<0.01)。4、QRT-PCR检测结果显示,与空白对照组比较,TGF-β1单独诱导组E-cadherin表达明显减弱(P<0.01),Vimentin表达水平明显增强(P<0.01);与TGF-β1单独诱导组比较,2.5mg/ml、5mg/ml剂量华蟾素干预组E-cadherin表达显著增强(P<0.05),Vimentin表达水平显著降低(P<0.05)。5、Western blot检测结果表明,空白对照组、TGF-β1单独诱导组和2.5、5mg/ml剂量华蟾素干预组E-cadherin、Vimentin灰度值分别为(0.9427±0.0254、0.4098±0.0679)、(0.3629±0.0303、0.7612±0.0472)、(0.50831±0.0165、0.6304±0.0114)、(0.7194±0.0804、0.5365±0.0199),TGF-β1单独诱导组E-cadherin表达最低,而Vimentin表达最高,与空白对照组相比,TGF-β1单独诱导组E-cadherin表达显著减弱(P<0.05),Vimentin表达水平明显增强(P<0.05),2.5、5mg/ml华蟾素干预组E-cadherin表达较TGF-β1单独诱导组明显增强(P<0.05),而Vimentin表达显著降低(P<0.05)。结论:1、 TGF-β1可诱导人结肠癌SW480细胞发生EMT并增强细胞的侵袭及迁移能力。2、华蟾素对TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞的EMT有抑制作用。3、华蟾素能够抑制TGF-β1诱导的人结肠癌SW480细胞的增殖活力,并降低其侵袭与迁移能力。
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