论文部分内容阅读
本论文以我国重要海水养殖鱼类大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)为实验对象。研究了饲料中不同聚合度的糖源、糖替代脂肪以及糖替代蛋白对大菱鲆脂肪代谢和糖脂代谢相关基因Ghrelin表达量的影响。本文的研究内容和主要研究结果如下:1大菱鲆Ghrelin基因的全长克隆和序列分析以大菱鲆幼鱼为实验材料,利用同源克隆技术、3RACE技术和5RACE技术,从大菱鲆胃部组织中成功扩增出Ghrelin基因的全长序列。大菱鲆Ghrelin基因cDNA全长序列包括948个核苷酸,其中包括一个由321个核苷酸组成的开放阅读框。大菱鲆Ghrelin成熟肽包含22个氨基酸,分子量为2342.64u,理论等电点为12.02。在成熟Ghrelin的N末端,有一个非常保守的位点GSSFLSP,可能是Ghrelin的活性中心。BLAST分析显示,大菱鲆Ghrelin氨基酸序列与已知其他鱼类的Ghrelin氨基酸序列有很高的同源性。系统进化树分析显示,大菱鲆和大黄鱼组成一群,相似性最大,亲缘关系较近,Ghrelin蛋白将脊椎动物分成水生脊椎动物和陆生脊椎动物两大分支。2不同聚合度的糖源对大菱鲆脂肪代谢和Ghrelin基因表达的影响以初始体质量为(8.77±0.16)g的大菱鲆幼鱼为研究对象,比较分析饲料中添加3种不同聚合度的糖源(葡萄糖、蔗糖和糊精)对大菱鲆脂肪代谢相关酶活性、肌肉脂肪酸组成和Ghrelin基因表达量的影响。结果表明,不同聚合度的糖源显著影响了肝脏中与脂肪合成相关的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和苹果酸酶的活性(P<0.05)。饲料糖源为葡萄糖时,大菱鲆肝脏中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和苹果酸酶的活性显著(P<0.05)高于其他处理组,而蔗糖和糊精处理组之间没有显著(P>0.05)差异。对脂肪分解代谢相关酶活性的分析表明,肠道脂肪酶的活性受饲料中不同糖源的显著影响(P<0.05);肝脏脂蛋白脂酶的活性在糖源为葡萄糖时显著低于其他处理组(P<0.05);不同糖源对肝脂酶的活性没有显著影响(P>0.05);糊精组的总脂酶活性显著高于葡萄糖组(P<0.05)。葡萄糖组大菱鲆肌肉中的C16:0和C18:0的含量显著高于糊精组,而C16:1和C18:1的含量显著低于糊精组(P<0.05)。总的来说,饲料中不同聚合度的糖源对大菱鲆肌肉脂肪酸含量的影响主要集中在饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸上,而对多不饱和脂肪酸的影响有限。随着糖源聚合度的增加,大菱鲆胃部Ghrelin基因的表达量呈下降趋势,葡萄糖组显著高于(P<0.05)其他处理组。3糖替代脂肪对大菱鲆脂肪代谢和Ghrelin基因表达的影响本实验旨在研究饲料中糖替代脂肪对大菱鲆脂肪代谢和Ghrelin基因表达的影响。以白鱼粉、酪蛋白和明胶为主要蛋白源,以鱼油和大豆卵磷脂为主要脂肪源,分别添加(0%,5%,15%,28%)的糊精,配制成4种糊精替代鱼油(11%,9%,5%,0%)的半精制实验饲料。实验结果表明:随着糖添加比例的升高,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和苹果酸酶的活性呈先升高后降低的趋势,在糖添加比例为15%时,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性最高为(34.66±0.67)nmol/min/mg Prot,显著高于(P<0.05)糖添加为0%和5%的处理组,苹果酸酶的活性在不同处理组间没有显著(P>0.05)差异。肠道脂肪酶的活性随糖添加比例的增加呈现先升高后降低的趋势,在5%糖添加时脂肪酶的活性最高为(21.11±0.36)U/g Prot,显著(P<0.05)高于其他处理组;脂蛋白脂酶的活性不受糖替代脂肪的显著(P>0.05)影响,但是脂蛋白脂酶的活性随糖添加比例的增加呈下降趋势;肝脂酶和总脂酶的活性随糖添加比例的增加而降低,糖添加为28%的处理组显著(P<0.05)低于0%的处理组;大菱鲆胃部Ghrelin基因表达量受糖替代脂肪的显著(P<0.05)影响,在15%糖添加组,Ghrelin表达量比5%和28%糖添加组显著(P<0.05)升高,但是比0%添加组显著(P<0.05)降低。4糖替代蛋白对大菱鲆脂肪代谢的影响在饲料中添加不同水平的糊精(0%,5%,15%),分别替代不同水平(50%,45%,40%)的蛋白质以研究糖替代蛋白对大菱鲆肝脏中脂肪合成相关酶活性、脂肪分解相关酶活性以及肝脏中脂肪酸组成的影响。结果显示:随着糖添加比例的增加,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性显著(P<0.05)升高,苹果酸酶的活性也随糖添加比例的增加而升高,在糖添加为15%的处理组达到最高,但0%和5%糖添加处理组间差异不显著(P>0.05)。随着糖添加比例的升高,肠道脂肪酶的活性呈现降低的趋势,在糖添加为0%时脂肪酶的活性显著(P<0.05)高于糖添加15%的处理组,而和5%糖添加组相比没有显著(P>0.05)性差异,糖对蛋白的替代对脂蛋白脂酶、肝脂酶和总脂酶的活性均没有显著(P>0.05)影响。饲料中糖替代蛋白对大菱鲆肌肉中脂肪酸组成的影响不大,对单不饱和脂肪酸中C16:1有显著(P<0.05)影响,对多不饱和脂肪酸、高不饱和脂肪酸等均没有显著(P>0.05)影响。