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玉花兰是一种观赏价值极高的高档兰花,但由于其繁殖系数低,无法进行规模化生产,组织培养是解决这一问题的重要途径。本试验以玉花兰的根状茎为外植体,研究了玉花兰根状茎的大量增殖和绿芽分化的各种因素,同时比较在固态培养基培养、液态培养基振荡培养和生物反应器培养条件下根状茎增殖和绿芽分化情况,并利用气升式生物反应器研究了接种密度、空气注入量的影响,为玉花兰的大量、快速扩繁提供理论依据。
本研究结果表明,Hyponex-2(N:P:K=20:20:20)培养基有利于玉花兰根状茎的形成和生长,MS培养基次之,KC、VW和Hyponex-1(N:P:K=7:6:19)培养基则不利于根状茎的形成及生长;当Hyponex-2培养基中加入BA0.5mg/L与NAA0.5mg/L时既促进根状茎形成又促进其生长;在培养基中加入蔗糖比葡萄糖和果糖效果佳;使用PC瓶在400Lux的光照强度下进行培养有利于根状茎的增殖。
对绿芽分化方面,Hyponex-2培养基有利于玉花兰绿芽的分化,而且诱导数多,生长良好。BA促进绿芽的形成,且在4mg/L时效果最佳。为了促进从根状茎的绿芽分化,需选择根状茎的上部作为外植体为好。绿芽分化阶段,同样也是400Lux的光照条件比较适宜。在生根培养基中添加1.0mg/L的NAA(BA为0.5mg/L)有利于根的诱导,同时也促进地上部的生长发育。
通过固态培养、液态震荡培养和生物反应器培养方式的比较,发现在生物反应器中能培养出粗壮、健康的根状茎和绿芽,固态培养次之,液态震荡培养中的根状茎头部发白、发肿,不利于根状茎的增殖和绿芽的诱导。调查在气升式生物反应器中接种密度、空气注入量的影响,结果表明:根状茎增殖和绿芽分化的最适接种量是200个,而最适通气量是0.1vvm。