方剂是中医药临床防治疾病的主要应用形式。方剂遵循辩证施治的原则,针对不同的证候发挥相应的功效,实施整体治疗。方剂功效的来源是什么?方剂中是否存在与特定功效相关的化学成分群(即方剂功效物质组)?这是诠释方剂组方科学内涵的重要科学问题之一。研究方剂功效物质组首先需要辨识方剂化学成分。目前,液质联用分析技术凭借其高效的分离能力与丰富的结构信息逐渐替代传统植物化学分离分析法,成为研究辨识方剂化学物质的主流技术。然而,目前方剂化学物质的液质联用分析研究中仍存在数据处理难度高和活性成分辨识效率低等技术缺陷,制约其辨识效率。另一方面,即使实现了个别方剂化学物质的系统性辨识,方剂化学成分与药理活性、中医证候及临床疗效等各个知识单元之间依然处于割裂状态,我们还是无法定位作为中医学和现代医学这两大系统间桥梁的方剂功效物质组。若要研究方剂功效物质组,我们就必须对前述各知识单元进行关联分析。因此,如何提高方剂化学物质辨识效率、关联分析方剂各知识单元成为了研究方剂功效物质组的关键技术瓶颈问题。仲景方(《伤寒论》《金匮要略》)作为“群方之祖”,是后世诸多变方、加减方的来源,为历代医家所重视。类方作为仲景方的重要表现形式,反映了以方类证的组方思想,是阐释仲景方组方科学内涵的突破口。本文以小青龙汤类方和五苓散类方为研究载体,研发了三种辨识方剂化学物质的新方法并构建了三个层次的知识关联网络对各知识单元进行关联分析,在此基础上研究了小青龙汤类方宣肺平喘、助阳解表功效物质组。本文共分为两部分,主要内容与学术贡献如下:论文第一部分针对方剂化学/活性物质辨识研究中的技术瓶颈问题开展相应研究,主要内容包括:1.针对方剂液质联用分析数据处理难点,提出了基于预分类策略的方剂液质联用数据处理方法。通过构建方剂液质联用数据的三维离子地图,依据化合物化学相似性对类方化学成分预分类,系统辨识了小青龙汤类方85个化学成分和五苓散37个化学成分,降低了液质联用数据处理难度,提高了辨识效率。2.针对方剂活性物质辨识周期长、成本高的缺点,将并行制备系统及亲和超滤方法分别与抗氧化、抗肿瘤、抗炎和抑制脂肪酶等活性筛选模型相整合,快速地从药材和方剂中辨识相应活性成分。本文第二部分聚焦于方剂各知识单元关联分析并应用于方剂功效物质组研究,主要内容包括:3.在研究辨识前述仲景方化学物质基础上,整合仲景方药材组成、化学成分、中医证候和临床疗效等知识单元,构建了三组仲景方知识关联网络。4.关联分析类方知识单元,探讨了类方功效差异,估测了小青龙汤类方宣肺平喘、助阳解表功效物质组所包含的44个化合物,并通过同功效中成药分析和Western Blot实验在相关靶点上对解表功效物质进行了验证。