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目的日本血吸虫泛素结合酶(Schistosoma japonicum ubiquitin conjugating enzyme,SjE2G)基因是在日本血吸虫母胞蚴与钉螺头足部组织浸出液共培养体系中呈差异表达的基因,可能是具有免疫保护力的血吸虫疫苗候选分子。本课题拟用实时荧光定量PCR对共培养日本血吸虫母胞蚴体内E2G基因的mRNA表达水平进行检测和验证,在体外克隆表达SjE2G蛋白,并研究该蛋白在母胞蚴体内的组织定位及其免疫保护性功能。方法首先,根据SjE2G的开放阅读框,设计实时荧光定量PCR特异性引物,用实时荧光定量PCR技术检测体外培养对照组母胞蚴和钉螺头足部组织浸出液共培养组母胞蚴的体内E2G mRNA表达水平,验证SjE2G基因在共培养母胞蚴体内的差异表达。随后,设计合成特异性SjE2G基因全长引物,以日本血吸虫母胞蚴cDNA为模板,扩增目的基因;用扩增的目的基因构建重组表达质粒PET28a(+)-SjE2G,转化E.coli BL21后,IPTG诱导SjE2G大量表达;用纯化后的重组SjE2G蛋白定期免疫家兔和小鼠,其中免疫家兔用于制备收集免疫兔血清,免疫组织化学染色法检测SjE2G在日本血吸虫母胞蚴体内中的表达与分布;小鼠定期免疫6w后攻击感染日本血吸虫尾蚴,感染后42天,统计各组小鼠的虫荷数和每克肝脏的虫卵负荷,计算减虫率和减卵率,评价SjE2G的免疫保护性效果。结果实时荧光定量PCR结果显示SjE2G基因mRNA表达在与钉螺头足部组织浸出液共培养母胞蚴体内呈显著上调表达,其表达水平是对照组母胞蚴的10.44倍(p<0.01)。PCR扩增出672bp的SjE2G DNA片段,并成功构建了 PET28a(+)-SjE2G重组表达质粒,获得了分子量约为23kDa的重组SjE2G蛋白。免疫组化染色结果显示日本血吸虫母胞蚴体壁和细胞质中有大量呈棕褐色团块状的SjE2G沉淀。免疫保护性实验结果显示,实验组减虫率为13%、减卵率为6%,对照组减虫率为7%、减卵率为2%,二组均无统计学差异(P>0.05)。结论E2G基因在与钉螺头足部组织浸出液共培养日本血吸虫母胞蚴体内表达明显增强;SjE2G蛋白主要分布于日本血吸虫母胞蚴体壁和细胞质,其对日本血吸虫感染没有免疫保护性作用。