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白癜风是一种临床常见的自身免疫性皮肤病,临床表现为渐进性色素脱失造成的皮肤或黏膜白斑。皮损多位于颜面等暴露部位,因而严重影响了患者正常的学习、就业以及社交等日常活动。白癜风作为临床常见的皮肤科难治性疾病,具有易诊难治、容易复发的特点,其相关研究已经持续了近百年,然而其发病机制仍不明确,目前存在着多种学术假说,当前普遍认为白癜风可能是由于多种致病因素之间的相互作用,共同导致了黑素细胞的破坏。近年来在白癜风发病的免疫学机制研究中,普遍认为细胞毒性T细胞（CD8+T细胞）是主要的杀伤细胞。大部分研究集中在CD8+T细胞的趋化、诱导、招募、阻滞中,并取得了一定的进展,但是目前关于白癜风体液免疫的研究尚不多见。现有文献提示,滤泡辅助性T细胞（T follicular helper cell,Tfh）参与体液免疫的调节,对B细胞的分化起重要作用,其过度的辅助会导致自身免疫性疾病的发生。为了进一步理解白癜风的自身免疫机制,我们针对进展期非节段型白癜风患者,开展了Tfh细胞在体液免疫中辅助调节作用的研究。第一部分,我们共计收集了75例进展期非节段型白癜风患者的外周血,同时纳入了67例平均年龄和性别组成均与之相近的健康人作为对照。采用流式细胞术,检测了在外周血单个核细胞中Tfh细胞的比例,以及各个Tfh细胞亚群在CD4+CXCR5+Tfh细胞中的比例。结果显示,进展期非节段型白癜风患者外周血中CD4+CXCR5+Tfh细胞、CD4+CXCR5+PD-1+Tfh细胞、CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞比例均显著增加;在CD4+CXCR5+Tfh细胞中CXCR3-CCR6-Tfh2型细胞亚群比例明显下降,CXCR3-CCR6+Tfh17型细胞亚群比例显著增加,Tfh1/Tfh17比例下降,（Tfh2+Tfh17）/Tfh1比例升高。利用流式染色检测Tfh细胞分泌特征性细胞因子IL-21的功能变化,我们发现表达IL-21的Tfh细胞比例显著升高。通过对Tfh细胞中,表达转录调节因子Foxp3的一类抑制性T细胞,滤泡调节性T细胞（T follicular regulatory cell,Tfr）的检测,我们发现CD4+CXCR5+Foxp3+Tfr细胞比例显著降低,Tfr/Tfh比例降低。以上结果提示了进展期非节段型白癜风的Tfh细胞处于活跃状态,且存在Tfr/Tfh的失衡。我们推测这可能导致生发中心过度活跃,辅助B细胞分泌过量抗体参与体液免疫。因而,我们进一步分析了进展期非节段型白癜风患者外周血中各类抗体的表达水平,以及B细胞亚群在外周血单个核细胞中的比例。结果显示,在进展期非节段型白癜风患者外周血中,Ig M及Ig G3水平显著降低,Ig G1水平显著升高,而Ig A、Ig E、总Ig G、Ig G2与Ig G4的表达水平没有显著差异,CD19+B细胞以及B细胞各个亚群即幼稚B细胞、记忆性未转化B细胞、记忆性转化B细胞以及双阴性B细胞的比例也同样没有统计学差异,而CD19+CD27hiIg D-抗体分泌B细胞（Ab secreting B cells,Sab）的比例明显升高。进一步研究发现,进展期非节段型白癜风患者未成熟的过渡性CD19+CD24hiCD38hiBreg细胞比例显著升高,但CD19+B细胞中能分泌IL-10的抑制性Breg细胞比例与血浆中IL-10的表达水平均显著下降。提示过渡性CD19+CD24hiCD38hiBreg细胞的累积,可能会导致主要分泌IL-10的成熟Breg细胞减少,使其在生发反应及自身免疫性抗体分泌过程中发挥的抑制功能减弱。第二部分我们首先通过ELISA及免疫组化染色,验证了在进展期非节段型白癜风患者外周循环中及局部皮损处都存在着IL-1β表达水平的升高,同时我们发现IL-1β还可以协同IL-12诱导幼稚型CD4+T细胞向CD4+CXCR5+Tfh细胞分化,提示IL-1β参与了白癜风的免疫调节。为进一步研究IL-1β在白癜风中的作用,我们还利用q PCR及Western blotting检测了同属IL-1亚族的细胞因子IL-1α及IL-1β对黑素细胞生成黑素能力的直接影响。结果显示,IL-1α和IL-1β对黑素生成发挥相反的作用:IL-1α可以促进黑素细胞增殖,同时增强黑素生成相关蛋白如MITF、TYR、TYRP1及TYRP2的表达,而IL-1β对黑素细胞活力没有影响,但可抑制MITF、TYR、TYRP1及TYRP2的表达。IL-1α无法增强黑素细胞及角质形成细胞ROS的产生,而角质形成细胞在IL-1β刺激下可以增加ROS的产生,提示IL-1β可以加重氧化应激,可能参与构成白癜风自身免疫反应的始动环境。本研究首次系统性地检测了进展期非节段型白癜风患者外周血中Tfh细胞及B细胞亚群比例的改变,以及外周血中各类抗体的表达水平。同时检测了IL-1β对黑素细胞以及Tfh细胞的诱导作用,发现了IL-1家族中IL-1α和IL-1β对黑素生成具有相反的作用。以上实验结果,进一步充实了进展期非节段型白癜风体液免疫的研究,并阐述了IL-1β在白癜风中可能的作用机制,为下一步探索新的治疗靶点提供实验室依据。