AML患者CFU-GM增殖与相关调控因子的研究

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目的:二十世纪七十年代建立的CFU-GM培养技术和八十年代中期建立的MIC分型方法对AML患者都有预测预后的价值,然而,关于CFU-GM与MIC在预测预后方面的内在关联以及AML患者CFU-GM集落生长受抑的机制,目前尚无系统而深入的研究。本研究拟围绕急性髓细胞白血病(AML)患者正调控因子GM-CSF/GM-CSF受体α和负调控因子TGFβ1、TNFα和LIF及与CFU-GM关系的变化,联系AML患者FAB亚型、免疫学标记及细胞遗传学(MIC)的改变,观察两种方法的预后间的关系,探讨GM-CSF与其α受体及相关负调节因子TGFβ1、TNFα和LIF在AML患者体内的表达,并分析它们对CFU-GM髓系造血异常和白血病凋亡分布(Fas抗原)的影响。 方法:应用造血祖细胞体外培养、流式细胞仪CD45PE-SSC双参数分析检测法、酶联免疫吸附试验ELISA法等现代生物学技术,分别检测了经MIC确诊的66例初治AML患者和18例正常对照者的骨髓CFU-GM集落形成、GM-CSF受体α(CD116抗原)、Fas(CD95)抗原以及血浆中细胞因子GM-CSF、solGM-Rα、TGFβ1、TNFα和LIF的水平。 结果:①66例AML患者骨髓CFU-GM集落形成明显受抑,平均集落数为5.8个/2×105MNC,簇/落比值高达12.2:1。按Moore分型,CFU-GM生长方式呈Ⅰ型生长者20例,CR率为25.0%;Ⅱ型生长者12例,CR率为75.0%;Ⅲ型生长者11例,CR率为27.3%:Ⅳ型生长者23例,其中ⅣA型生长者11例,CR率为90.1%,ⅣB型生长者12例,CR率为33.3%;CFU-GM呈ⅣA型和Ⅱ型生长者CR率明显高于Ⅰ型、Ⅲ型和ⅣB型生长者(P<0.01),证实AML患者CFU-GM生长方式具有判断预后的价值。同时发现AML患者CFU-GM生长方式与患者染色体核型、免疫分型具有较高的一致性,表现为高危组染色体者几无CFU-GM集落形成,中高危组染色体者CFU-GM多为Ⅰ型+Ⅲ型+ⅣB型生长,而低危组染色体者CFU-GM多呈Ⅱ型+ⅣA型生长;免疫分型分析显示,75%的CD34抗原阳性表达患者CFU-GM集落呈Ⅰ型+Ⅲ型+ⅣB型生长,明显高于呈Ⅱ型+ⅣA型生长者,P=0.037,同时,CR率为33.3%的ⅣB型CFU-GM生长者,CD13抗原表达率最高,证实CD13高表达预后不良,AML患者合并T淋系抗原CD2表达者,仅2/15例呈Ⅱ型+ⅣA型生长者。②正调控因子表达中,AML患者血浆GM-CSF、GM-CSF受体α、solGM-Rα表达的浓度明显高于正常对照,solGM-Rα增高者常伴有高WBC数、外周及骨髓高原幼细胞数及CD34、CD95和CD116抗原高表达等临床A州[L患者CFU心M增殖与相关调控因子的研究中文摘要特性。其中,G加卜CSF血浆浓度以城型(20.08士11 .95p动园)最高,Me型(7.93士1.10Pg/ml)最低(.P<0 .01),且cD34阴性患者和低危染色体患者GM一SF血浆浓度较高;GM一R。表达以MS型最高(4 0.46士27.63%),且与CDIO、CD14抗原表达密切相关;solGM一Ra血浆浓度在M。型(3897.75士2651.43pg/inl)最低,MS型(9990.92士6325.43pg/inl)最高(p<0 .05)。GM一RQ表达与solGM一a血浆浓度具有相关性,R为0.371,P值<0.01。从CFU一GM生长方式角度分析,GM一CSF浓度在IV^型最高,m型最低;so1GM一Ra在W^型最低,WB型最高。GM一CSF、CDI 16和so1GM一RQ三个变量均与AML患者CFU一GM集落数无明显相关性。③三种负调控因子TGF一p,、TNF一a和L作在AML患者血浆中均见增高,分别为13 .08士9,77ng/ml、10.67士1 5.llpg/ml、4.23士4.73pg/ml,与正常对照比较有显著差异,P值均<0.05。FAB亚型中,三种负调控因子的表达呈不均一性,其中L正血浆浓度在MS患者异常高表达(7 .14士6.62 pg/ml);TNF一a血浆浓度在呱和M3患者中异常高表达,尤其呱患者血浆TNF一a浓度很高;TGF一p,血浆浓度在喊和峡患者中较高。CFU一GM生长类型为11型十WA型组的患者,其L作血浆浓度低于呈I型+m型+WB型生长者;AML患者血浆TGF一p.水平与CFU一GM集落数呈负相关,R为一0.332,P值<0.01。 结论:①AML患者的CFU一GM集落生长明显受抑,其生长方式可判断预后。②首次系统比较分析了AML患者CFIJ.GM与MIC分型在判断预后中的关联,结果提示二项预后指标之间存在较好的一致性。③正调控因子GM一CSF及其。受体在AM[L患者中的表达明显增高,尽管上述因子表达水平与AML患者CFU.GM的集落形成无直接相关性,但具有预报预后的价值,表现为GM一SF表达增高者多见于MIC的M3型、CD34.者和低危染色体核型者及CFU一GM呈WA型生长者,因而该指标升高提示预后较好;而solGM一RQ水平升高者多见于如C的MS型、CD34+、CD95十和CDI 16十表达者及高白细胞和高原幼细胞者,因而该指标升高提示预后不良。④负调控因子TGF一pl、mF心和L正表达在AML患者中均见增高,其中,TGF一pl水平与CFU一GM集落数呈负相关,推测AML患者CFU一GM集落形成受抑似与体内过高表达TGF pl有关。⑤首次开展CD45PE一SSC双参数分析检测冻存标本的抗原表达,并证实该方法用于检测冻存标本具有可行性。
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