成骨蛋白-1（Osteogenic Protein-1，OP-1）又称骨形成蛋白-7（Bone Morphogenetic Protein，BMP-7）。最早由Ozkaynak发现，并于1990年将其基因克隆成功。随后对它的蛋白组成、生物学作用等有了深入的认识。OP-1属TGF-β超家族，与TGF-β家族成员有很高的同源性。人的OP-1基因位于第20号染色体上，其全长cDNA 1878bp，开放读框1296bp，编码431个氨基酸，由N端的信号肽、中间的前肽和C端的成熟肽构成。成熟而具有活性的OP-1，以二聚体糖蛋白形式存在。OP-1除具有BMP家族成员所特有的骨诱导功能外，还与牙齿发育，牙体、牙周组织的修复和矿化，造血系统以及神经系统等许多重要的生理功能有关。然而，由于天然来源的OP-1数量有限，对其功能研究及应用都受到了极大的限制，随着基因工程技术的发展，使大规模生产具有活性的OP-1重组蛋白质成为可能。 为了拓宽OP-1的研究与应用，通过基因工程技术，获得具有生物学活性的OP-1蛋白质，探讨其在牙齿发育、矿化中的作用机制，以及作为一种新的牙髓、牙周病治疗材料用于临床，促进修复性牙本质的形成和牙周组织再生等。本课题主要进行了以下几方面的研究： 一．OP-1成熟肽基因的克隆及多克隆抗体制备 本实验首先利用RT-PCR技术，从培养的人牙乳头细胞中，克隆出人OP-1成熟肽段基因，并在pEH4原核表达载体中获得高表达，表达量占菌体总蛋白的33％左右。将表达蛋白初步纯化，免疫新西兰大白兔，获得了兔抗人OP-1多克隆抗血清，效价为1∶100000，为真核系统表达产物的免疫学检测及其OP-1的表达和功能研究创造了条件。 二．OP-1全长基因克隆及CHO细胞转染 在OP-1原核表达并制备多克隆抗血清的基础上，进行OP-1真核系统表达研究。通过获得的人牙乳头细胞总RNA，首次采用扩增高GC含量基因的PCR试剂盒，得到hOP-1约1300bp的全长段基因。序列测定正确后，插入pCI高效真核表达载体，并利用脂质体介导转染CHO细胞，