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目的:研究分子伴侣介导的自噬(CMA)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)中β-淀粉样蛋白(Amyloid-β,Aβ)清除的机制,探讨靶向调节脑内CMA相关蛋白对AD细胞模型及APPswe/PS1d E9双转基因小鼠认知功能和脑内淀粉样蛋白沉积的影响。方法:1、离体层面:应用HEK293/APPswe细胞(稳定表达人类淀粉样前体蛋白695瑞典型突变的人胚肾细胞)和HEK293/APPwt细胞(稳定表达人类野生型淀粉样前体蛋白695c DNA的人胚肾细胞)模型,通过腺病毒转染技术过表达CMA相关分子或沉默CMA相关分子来检测淀粉样蛋白前体(Amyloid precursor protein,APP)裂解产生的毒性淀粉样肽,并用si RNA技术靶向调节Hsc70和Lamp-2A。采用免疫印迹法或ELISA试剂盒检测细胞内Aβ1-42,Hsc70和Lamp-2A。2、活体层面:选取雄性3月、7月及11月龄APPswe/PS1d E9双转基因小鼠以及其对照同源野生小鼠,通过腺病毒转染技术过表达CMA相关蛋白或沉默CMA相关蛋白来检测淀粉样蛋白前体(Amyloid precursor protein,APP)裂解产生的毒性肽,并用si RNA技术靶向调节Hsc70和Lamp-2A。通过Morris水迷宫测定小鼠空间学习记忆能力,采用Western Blot方法或ELISA法检测小鼠脑内Aβ1-42,Hsc70和Lamp-2A,通过尼氏染色观察神经元形态变化,采用免疫组化观察胞外淀粉样斑的变化。结果:1、离体层面:在表达Aβ的HEK293/APPswe细胞中,CMA被证实参与体外培养细胞内的Aβ降解。当我们利用si RNA使培养细胞中的Lamp-2A或Hsc70低表达时,Aβ水平出现轻微上升,而这些效应在经3-MA处理并移除血清的情况下很明显。相反,Lamp-2A或Hsc70的过表达使得Aβ的聚集降低。这些数据支持了Lamp-2A和Hsc70经CMA依赖性途径参与Aβ清除的理论。2、活体层面:与同月龄对照小鼠相比,我们发现7月龄的APP/PS1小鼠大脑中的Hsc70和Lamp-2A水平出现明显下降,Hsc70水平的改变在11月龄APP/PS1小鼠中更为明显。由此得出,经Lamp-2A或Hsc70-腺病毒处理过小鼠的皮层和海马区域内的平均Aβ沉积明显比对照组低。此外,Morris水迷宫试验证实APPswe/PS1d E9小鼠逃脱潜伏期提高较慢。相反,Lamp-2A或Hsc70-腺病毒处理过的小鼠的空间学习能力得到明显提高,试验中逃脱潜伏期时间缩短。结论:本研究表明CMA对Aβ的清除机制存在作用。有可能为AD患者老年斑的形成开辟一条新的重要途径。同时,靶向调节CMA途径依赖蛋白,可能为AD患者的靶向治疗提供潜在全新方向。