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哺乳动物胚胎冷冻保存技术的应用促进了胚胎生物工程的发展。近年来胚胎冷冻保存技术已取得长足的进展,但还存在很多问题没有解决。尽管在冷冻前对胚胎进行了严格的选择和处理,但是因所用冷冻保护液的不同、冷冻方法的差异,而使冻胚的解冻方法、培养或移植后的发育率又各不相同。本实验应用乙二醇(EG)冷冻小鼠发育不同阶段胚胎,将1.8MEG冷冻保存的胚胎解冻后直接移入培养液培养,探讨常用的冷冻保护剂(乙二醇)的适宜浓度、平衡时间、简单的解冻方法、胚胎冷冻-解冻后的形态变化和发育能力。实验结果表明:
1.应用1.8MEG冷冻小鼠致密晚期桑椹胚可获得较高的囊胚发育率和囊胚孵出率(80.83%、75.0%)。
2.致密晚期桑椹胚的囊胚发育率和囊胚孵出率显著高于4细胞(cell)、8细胞胚和致密早期桑椹胚。
3.小鼠胚胎在EG冷冻保护液中的平衡时间保持在5~15min即可。
4.应用冷冻保护剂时,分步(浓度由低到高)处理胚胎,冷冻-解冻后可获得较高的胚胎存活力。
5.在冷冻保护液中可以添加、也可以不添加蔗糖(以0~0.1M为宜),对胚胎发育率的影响差异不显著。
6.冷冻小鼠胚胎可应用乙二醇,但是与常用的丙二醇(PG)相比,PG(含0.1MS)冷冻胚胎的效果更好(P<0.05)。
7.应用EG冷冻保存的胚胎,解冻后脱除EG与不脱除EG对冷冻-解冻胚胎的发育没有显著影响。