【摘 要】
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近年来,随着人们对融合标签技术的不断研究探索,有越来越多的融合蛋白标签应用于实际中。因大肠杆菌表达系统因研究背景清楚,与其他表达系统相比,有着经济高效、节约成本、步骤简便、易于后期纯化等诸多优势,因此,在生物化学与分子生物学和生物技术产业化发展过程中有举足轻重地。由于许多外源蛋白在大肠杆菌表达系统中表达时,易产生包涵体或者影响外源蛋白自身的功能,而合适的融合标签可以确保目的蛋白高效生产、实际应用和
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近年来,随着人们对融合标签技术的不断研究探索,有越来越多的融合蛋白标签应用于实际中。因大肠杆菌表达系统因研究背景清楚,与其他表达系统相比,有着经济高效、节约成本、步骤简便、易于后期纯化等诸多优势,因此,在生物化学与分子生物学和生物技术产业化发展过程中有举足轻重地。由于许多外源蛋白在大肠杆菌表达系统中表达时,易产生包涵体或者影响外源蛋白自身的功能,而合适的融合标签可以确保目的蛋白高效生产、实际应用和长久保存,因此利用融合标签技术以提高蛋白质的可溶性、表达量、热稳定性甚至其活性的方法已被广泛应用。使用相对分子量较小并且具有超酸性的蛋白作为融合标签是一种新的解决策略。酰基载体蛋白（Acyl Carrier Protein,ACP）是生物体脂肪酸合成酶系的重要组成成份,并且在细胞内其他代谢过程中发挥重要的作用。在不同生物体内的ACP以不同形式存在,但是结构与功能及其相似,即一个具有酸性的小分子蛋白。本实验利用ACP与TEV蛋白酶（Tobacco Etch Virus protease,TEV）、绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein,GFP）、α-淀粉酶（α-Amylase,Amy）融合,经高效的诱导表达后,在相应的条件下,探索融合蛋白在是对应有融合标签ACP时的可溶性表达、稳定性以及活性差别。同时探索ACP与外源蛋白的N末端或C末端相连时,对外源蛋白的稳定性的影响。实验结果表明,在一定的条件下,ACP作为融合标签可提高外源蛋白的可溶性与表达量;此外,ACP可明显的提高外源蛋白的稳定性,提高了10℃左右;当ACP与外源蛋白的N末端或C末端相连时,对提高稳定性的效果相同;经过酶活分析预测,虽然融合标签ACP在短时间会影响外源蛋白的活性,但当反应时间足够长时,含有融合标签ACP的外源蛋白的工作效果最终会超过不含有融合标签ACP的外源蛋白。
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