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本论文选择世界三大养殖品种之一的凡纳滨对虾为研究对象,制备五种蛋白质含量均为34%,脂肪含量分别为6%、8%、10%、12%和14%的等氮等能饲料,在循环水养殖系统中进行为期30天和60天的养殖实验,并就以下两个科学问题展开了探讨:1)饲料中不同脂肪含量对凡纳滨对虾体重、体长、体组成、肥满度、成活率等生长指标的影响。2)饲料中不同脂肪含量对凡纳滨对虾免疫相关基因的表达谱或酶活性的影响。主要研究内容如下:
1.通过对各处理组中凡纳滨对虾的体重及体长测定及统计分析发现,饲料中的不同脂肪含量主要对其体重造成显著影响,对对虾体长影响不显著。
2.对各处理组中凡纳滨对虾的肥满度、增重率和特定生长率进行计算,结果表明30d喂养周期中以12%脂肪含量的饲料喂食的对虾和60d喂养周期中以10%脂肪含量饲料的对虾的体重及特定生长率显著高于其余各组。
3.对两个喂养周期的成活率进行统计,分析表明前30天对虾存活率随着喂养饲料的脂肪含量的上升而下降,后30天新增死亡个数随着饲料脂肪含量下降而减少,成活率组间差异不显著。
4.测定凡纳滨对虾体内不同组分的含量,结果显示饲料中脂肪含量的改变能显著影响对虾体组成的脂肪和蛋白含量,对水分和灰分所占体重的比例影响不显著。
5.以HSP60作为危险信号分子标记对该基因的表达情况进行分析,前30天投喂10%脂肪含量饲料的对虾肝胰腺和细胞中HSP60表达显著高于其余各组。HSP60在以6%脂肪含量的饲料喂养60d的对虾体内血细胞中最高,10%脂肪含量组最低,差异显著。
6.以超氧阴离子的含量、MnSOD的表达量为指标,研究不同脂肪含量的饲料对血细胞ROS通路的影响。结果表明,经过60天养殖,饲料中脂肪含量越高,血细胞超氧阴离子水平越低,其中8%脂肪含量组MnSOD表达量最高,呼吸爆发能力最低,差异显著。
7.通过血蓝蛋白的基因表达量检测和体内全长蛋白的定量可反映出该蛋白的剪切发生情况。结果分析表明,在60d样品中,随着饲料脂肪含量的提高,血蓝蛋白表达下降,血细胞中血蓝蛋白含量上升,表明血蓝蛋白的剪切随着脂肪含量的上升而下降。
8.免疫因子LGBP和proPO的表达量与饲料中的脂肪含量有一定相关性,并主要在血细胞中表达,而在肝胰腺中表达量较低。
9.在肝胰腺中,与免疫、解毒相关的CAT、GPx和AKP都有很强的活性,并在一定范围内(6%-12%)随着饲料脂肪含量的增加而上升。当摄入的饲料脂肪含量达到14%时,肝胰腺免疫功能受到影响。
10.对有毒的脂类氧化产物MDA进行定量,发现其在脂肪量为10%的饲料中水平最低,血液中MDA含量随着脂肪含量提高而上升。说明该饲料配方下凡纳滨对虾对摄入的脂肪利用率较高,抗氧化能力强,产生较少MDA。