【摘 要】
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1、研究人员克隆了三种脉胞霉(Neurosporacrassa粗糙脉胞霉,Neurosporaintemedia中间脉胞霉和Neurosporasitophila好食脉胞霉)NADP-GDH基因,两种啤酒酵母NADP-GDH基因,进行序
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1、研究人员克隆了三种脉胞霉(Neurosporacrassa粗糙脉胞霉,Neurosporaintemedia中间脉胞霉和Neurosporasitophila好食脉胞霉)NADP-GDH基因,两种啤酒酵母NADP-GDH基因,进行序列分析.N.intermedia,N.sitophila-gdh基因为首次报道.脉胞霉的基本全长1492bp,由两段内含子插入,分别长66bp,61bp.成熟基因1365bp,与大肠杆菌的gdh基因同源性较高.Ni-gdh,Ns-gdh基因与Nc-gdh同源性很高,达98﹪.其中Ni-gdh有23个碱基,5个氨基酸不同,Ns-gdh有25个碱基,9个氨基酸与Nc-gdh不同.酵母gdh基因没有内含子,全长1362bp.2、将前述三种脉胞霉GDH基因克隆至pET30a质粒,在大肠杆菌中表达,纯化后进行酶活性及米氏常数(Km)的测定,结果发现大肠杆菌表达的Ni-GDH具有比较高的酶活性与亲和力.3、研究人员首次选择中间脉胞霉NADP-gdh和小球藻NADP-gdh基因,构建植物表达载体pROKII-gdh,采用农杆菌直接转化法转化烟草后,经PCR,Southern,Nouthern鉴定.T<,0>,T<,1>代分别培养在安全培养基和不同含氮量的培养基中,蛭石中,测定干重、总氮量、培养基残留氮等氮素利用率指标.
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