第一章 芍药苷对于非酒精性脂肪肝的小鼠一般状况、糖脂代谢和胰岛素抵抗的影响目的通过研究芍药苷对饮食诱导的非酒精性脂肪肝小鼠的一般情况、糖脂代谢、炎症及胰岛素抵抗的影响。方法从武汉大学实验动物中心购买7周龄雄性C57BL/6J野生型小鼠为实验对象。饲养环境稳定(温度为：23±2℃,湿度为：60±5%,每天光照时间为：7am～7pm)。实验动物可自由进食食物和饮用水。适应1周后根据饲料不同将实验小鼠分为4组：正常对照组(Control, n=10)、正常干预组(Con+Pa, n=10)、模型组(HF,n=10)、模型干预组(HF+Pa, n=10)。正常对照组采取普通饮食(ANI-76A饲料：11.5%的脂肪,67.7%的碳水化合物,20.8%的蛋白质)。正常干预组是在普通饲料的基础上添加浓度为0.05%的芍药苷。模型组小鼠则采用高脂饮食(高脂饲料为：37.4%的脂肪,42.6%的碳水化合物,20.0%的蛋白质)诱导。模型干预组则在高脂饲料中添加0.05%的芍药苷。小鼠可自由进食,时间共24周。每周记录小鼠的摄食情况,每2周记录小鼠的体重。动物实验结束前一天,小鼠隔夜禁食,第二日检测小鼠空腹体重和身长,并计算Lee’s指数：Lee’s指数=体重(g)1/3*1000*身长(cm)-1。对所有小鼠进行眶后静脉丛采血,分离血清(4000 rpm,30 min,4℃)。待小鼠完全麻醉后,迅速处死并分离肝脏组织,计算肝指数：肝指数=肝重(g)/空腹体重(g)*100%。留取肝左叶组织,其中部分固定在10%的中性福尔马林溶液里,行病理学分析和实验。分离出内脏脂肪(包括附睾脂肪垫、腹膜后白色脂肪组织和肾周脂肪组织)并称重,计算脂肪指数：脂肪指数=脂肪重(g)/空腹体重(g)*100%。结果1、小鼠一般状况：通过高脂饮食诱导24周之后,我们发现模型组小鼠出现了中心性肥胖、高血糖症,胰岛素抵抗、血脂异常、炎症状态及肝脂肪变性。到实验结束时,HF组HF+pa组小鼠体重分别达到41.53±0.799,37.24±0.964,(p<0.01), Con+Pa和Control小鼠体重无明显差异,说明芍药苷仅在肥胖状态下起到了抑制作用,降低了体重及内脏指数。其他的指标如：腹围、Lee’s指数、肝重和肝指数、脂肪重和脂肪指数等一些指标也发生了相应变化。芍药苷有效地防治了这些变化,可以减轻肝重和肝指数、脂肪重和脂肪指数等。2、小鼠的糖脂代谢和肝功能变化：高脂饮食诱导的模型组小鼠出现了显著的高血糖症、胰岛素抵抗、高脂血症和肝功能损害。高脂饮食组小鼠血清胆固醇水平增加了145.4%((p<0.01)),芍药苷使其降低到68.7%(p<0.01),LDL及HDL水平发生了同样改变,甘油三酯的变化不明显。长期的高脂饮食导致ALT及AST水平升高,芍药苷可使其降至正常水平。3、小鼠空腹血糖及胰岛素抵抗：我们的实验表明,长期的高脂饮食诱导小鼠HOMA-IR指数比对照组小鼠升高8倍,芍药苷使HOMA-IR指数降低至27.3%,空腹血糖、胰岛素水平存在同样的变化。长期的芍药苷干预可以缓解胰岛素抵抗。4、小鼠肝脏病理改变：持续高脂饮食使小鼠肝脏出现了明显的脂肪变性、炎症、气球样变性和坏死。芍药苷使得脂质包涵体的大小及数量明显降低。结论：1、芍药苷可显著抑制非酒精性脂肪肝的小鼠体重增加,并降低器官指数和Lee’s指数；2、芍药苷可显著改善非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢紊乱,具有明确的护肝作用；3、芍药苷明显地降低非酒精性脂肪肝空腹血糖、胰岛素抵抗,提高了机体对胰岛素的敏感性,并改善NAFLD小鼠对于葡萄糖的耐受力；4、芍药苷可显著抑制脂质异位沉积,进而减轻其对肝脏的脂毒性损害。第二章 芍药苷对非酒精性脂肪肝小鼠的保护机制目的：从降脂、抗炎、改善胰岛素抵抗方面,探讨芍药苷防治非酒精性脂肪肝的分子机制。方法：动物模型及分组同第一章部分。采用Real-time PCR法检测芍药苷对脂质代谢通路相关靶点及炎症基因的影响,包括：脂质的从头合成途径、PPARα介导的脂肪酸氧化代谢、PPARγ介导的脂质合成途径、以及甘油三酯的合成、脂质输出相关基因表达、糖代谢相关基因表达及炎症基因(TNF-α、IL-1, IL-6, MCP-1)的表达。结果：1、各组小鼠从头合成途径的比较：高脂饮食的诱导使小鼠肝脏内SREBP-1c、FAS、 ACCα显著上调,芍药苷抑制了三者的高表达,降低了脂质的从头合成。2、高脂饮食降低了模型组小鼠肝内(PPARα, CPT-1a, ACOX的表达,肝脏脂质氧化代谢受阻,肝内UCP2的水平在接受高脂饮食后显著上调。芍药苷改变了相关靶点的变化,增加脂质氧化发挥降脂作用。3、PPARγ介导的脂质合成途径：高脂饮食使PPARγ介导的脂质合成途径增高。给予芍药苷干预后,PPARγ表达基本上回到了正常水平,说明芍药苷可以下调PPARγ的表达影响脂质的合成。HMGCR和LDLR也有类似的表达。4、脂质输出相关基因LXR-α, ABCA-1在高脂饮食组明显升高,芍药苷降低了其表达,作者认为可能与小鼠体内一系列代偿机制有关。5、甘油三酯合成的相关靶点：模型组小鼠肝脏内的SCD-1升高了1.1倍,芍药苷治疗后其水平有所下降,但无明显的统计学差异,提示芍药苷的防治并未降低小鼠肝内的SCD-1表达水平。6、糖代谢相关基因里PEPCK和G6Pase在模型组小鼠体内分别增加了301% and178%,芍药苷降低了其表达。7、炎症相关基因表达：长期的高脂饮食导致炎症基因(如TNF-α、IL-1, IL-6, MCP-1)表达明显上调,芍药苷对其有明显的抑制作用。结论：1、芍药苷可以抑制SREBP-1c、FAS及ACCα,进而抑制脂质的从头合成途径；下调PPARγ、HMGCR和LDLR,减少脂质合成；提高PPARα、CPT-1a、ACOX及UCP2的表达,增加脂质氧化；对SCD-1影响不大,故不能降低甘油三酯血症。2、芍药苷可抑制炎症基因的表达,从而发挥其抗炎作用。