芪葛颗粒由黄芪、葛根、白芍、川芎、桂枝、姜黄、威灵仙和菊花八味药组成,具有温经活血、疏风散寒、宣痹通络的功效,用于神经根型颈椎病风寒阻络证引起的颈项强痛、肩背疼痛、颈项活动不利、肢体麻木、畏寒肢冷、四肢拘急。目前,芪葛颗粒现行质量标准控制指标较单一,不能较全面反映该制剂的质量状况,需建立更为完善的整体质量标准。本课题拟采用液质联用技术分析芪葛颗粒复方化学成分,并对入血成分进行研究,结合二者分析结果确定指标成分,在此基础上从薄层鉴别、含量测定、指纹图谱三个方面提升芪葛颗粒质量标准。具体研究内容如下:1、芪葛颗粒化学成分谱研究采用RRLC-Q-TOF-MS/MS技术对芪葛颗粒的化学成分进行快速分析。首先根据一级质谱获得的精确分子量,初步推测出82个可能存在的化合物;之后结合对照品比对、二级质谱裂解碎片及文献数据进行结构鉴定,成功地鉴定出78个化合物,包括黄酮类46个,有机酸类11个,内酯及其二聚体类11个,皂苷类10个。2、芪葛颗粒大鼠入血成分谱研究采用RRLC-Q-TOF-MS/MS技术对单次灌胃给药后大鼠眼眶血浆样品进行分析。通过与空白血浆及芪葛颗粒化学成分谱进行对比分析,共检测到31个化合物,包括入血原型成分8个(5个黄酮类、1个皂苷类和2个内酯类),可能的代谢产物23个(主要为葡萄糖醛酸、硫酸及氨基酸结合物)。3、质量标准提升研究(1)薄层鉴别研究本实验对原标准中葛根、白芍、川芎薄层鉴别方法中的溶液制备、展开剂等进行了优化,同时建立了桂枝的薄层鉴别方法,通过对不同温湿度、不同厂家薄层板等条件的考察,表明所建立的方法稳定、可靠,10批次实验结果表明该方法可用于芪葛颗粒的质量控制(2)含量测定研究结合芪葛颗粒化学成分谱和入血成分谱研究结果,本实验将3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹糖苷、大豆苷作为质量控制的指标成分,列入含量控制的范畴。采用HPLC技术建立了上述5种成分同时测定的分析方法,并进行了系统的方法学考察。结果表明,该方法的线性、精密度、稳定性、重复性及回收率等均良好,可用于芪葛颗粒质量评价。(3)指纹图谱研究采用HPLC技术建立了芪葛颗粒指纹图谱分析方法,以17批样品的指纹图谱共标定了 28个共有峰,并结合组方药材和化学成分谱研究结果,对共有峰进行了鉴定。同时应用化学计量学软件对17批芪葛颗粒进行了 PCA及OPLS-DA分析,结果表明影响芪葛颗粒质量的主要成分为藁本内酯、3’-甲氧基大豆苷、阿魏酸、kakkalide、3-’羟基葛根素、Daidzein-6-C-glucoside和23号峰,共7个色谱峰。该方法精密度、重复性、稳定性的考察结果均良好,可用于芪葛颗粒的指纹图谱评价。