拟南芥转录因子RAV1负调控ABA信号转导的机制研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fuming
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植物激素脱落酸(abscisic acid, ABA)能够调控植物生长发育中很多重要的生理过程,例如种子成熟、种子萌发、幼苗生长、气孔运动以及开花等;此外,ABA在植物响应外界各种环境胁迫的过程中也具有非常重要的调控作用。转录因子RAV1是AP2/ERF (APETALA2/Ethylene Responsive Factor)转录因子超家族中RAV (Related to ABI3/VP1)亚家族的成员,已有报道RAVl能够参与植物生长发育以及叶片衰老过程。本论文发现RAV1在种子萌发和幼苗生长过程中参与ABA信号转导过程。RAV1的表达量在种子萌发过程中迅速升高,外源ABA能够抑制RAV1的表达。与野生型相比,RAV1表达量降低的转基因植株(RAV1-underexpressing, RAV1-U)在种子萌发和幼苗早期生长过程中对ABA超敏感,而RAV1过量表达材料则对ABA不敏感表型。qRT-PCR的结果表明ABA响应基因(ABI3、ABI4、ABI5、Eml和Em6)在RAV1-U中表达上调,在RAV1过量表达材料(RAV1OE2和RAV1OE3)中表达下调。这些实验结果说明在种子萌发和早期幼苗生长过程中,RAV1作为ABA信号途径中的负向调控因子发挥功能。烟草系统中的实验结果表明RAV1能够负调控ABI5基因的表达。由于ABl5基因的启动子序列中具有能够被RAV1特异识别和结合的顺式元件:5’-CAACA-3’,因此进行了凝胶阻滞实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀实验(ChIP),这两个实验的结果都表明RAV1能够与ABI5基因的启动子直接结合。烟草系统实验、EMSA实验和ChIP实验的结果说明RAV1能够直接负调控ABI5基因的表达。之后对RAV1-U abi5杂交材料进行了研究,结果显示ABI5的功能缺失能够消除RAV1-U在种子萌发和早期幼苗生长过程中所表现出的ABA超敏感表型,说明ABI5基因位于RAVI基因的遗传上位。蛋白激酶SnRK (SNF1-RELATED PROTEIN KINASE)2.2、SnRK2.3和SnRK2.6是ABA信号转导过程中重要的正向调控因子。RAV1蛋白能够与SnRK2.2、SnRK2.3和SnRK2.6在细胞核中发生互作,并且SnRK2.2、SnRK2.3和SnRK2.6都能够体外磷酸化RAV1蛋白。烟草系统中的实验结果表明SnRK2.2、SnRK2.3和SnRK2.6能够降低RAV1对ABI5基因表达的抑制作用,将SnRK2.3在RAVI OE3中过量表达,能够明显减弱RAV1OE3的ABA不敏感表型,这些结果说明SnRK2.2、SnRK2.3和SnRK2.6能够抑制RAV1的活性。综上所述,本研究工作证明拟南芥转录因子RAV1能够直接调控ABI5基因的表达,进而在ABA信号转导过程中发挥重要功能,蛋白激酶SnRK2.2、SnRK2.3和SnRK2.6能够磷酸化抑制RAV1的活性。
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