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牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovine Viral Diarrhea/Mucosal Disease，BVD/MD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrh Virus，BVDV）引起牛的以发热、消化道粘膜糜烂、溃疡、脱落、出血性炎症、腹泻、白细胞下降、繁殖障碍为主要特征的一种传染病。该病在养牛国家广泛流行，形成持续性感染，引起免疫抑制，易导致继发感染，给畜牧业生产造成巨大的经济损失。目前，世界各国对于该病的防控主要通过采取动物检疫、淘汰和免疫接种相结合的策略。在欧美发达国家釆取检疫和淘汰为主，免疫接种为辅的方法来防控该病，使得该病得到有效控制。然而，我国由于缺乏理想的商品化疫苗和检测产品，导致该病在我国很多地区广泛流行。因此，研发用于BVD防控的疫苗和检测试剂，制定并完善BVD的防控体系对于保障我国养牛业的持续健康发展具有重要的意义。本研究以BVDV-2SW分离株为研究对象，对该病毒E2基因进行了克隆，运用大肠杆菌和酵母表达体系表达E2基因，通过SDS-PAGE和Western blot分析表达的重组E2蛋白的反应原性，选择表达量高且反应原性强的重组E2蛋白作为ELISA包被抗原，初步建立了检测BVDV抗体的间接ELISA方法，为BVDV检测试剂的研发奠定前期基础。主要研究方法和结果如下：1. BVDV E2基因的克隆及原核表达。从BVDV-2SW株细胞培养液中提取病毒的总RNA，采用RT-PCR方法从总RNA中扩增出BVDV E2部分基因，扩增产物经EcoRI、Not I双酶切后插入原核表达载体pET-28a（+）和pET-32a（+）中，构建E2基因原核表达载体pET-28a-E2和pET-32a-E2；将其转化至工程菌BL21（DE3）中，在37℃、1.0mmol/L IPTG浓度条件下诱导表达。SDS-PAGE分析发现，在分子质量32kDa和44kDa的位置出现与预期大小一致的蛋白条带；Western blot分析表明表达的重组E2蛋白可以与抗BVDV抗体发生免疫学反应，证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性。2. BVDV E2基因在毕赤酵母中的表达。通过RT-PCR方法扩增了BVDV E2部分基因，扩增产物经EcoR I、Not I双酶切后插入酵母表达载体pPIC9K中，构建了重组表达质粒pPIC9K-E2，经Sal I线性化后电击转化表达宿主毕赤酵母GS115。经PCR、表型及G418抗性筛选，成功获得具有G418抗性（1.0mg/mL）且表型为His+Mut+的阳性重组酵母转化子。阳性转化子经1.5%甲醇诱导，SDS-PAGE分析表明重组酵母可表达相对分子质量为23.2kDa的蛋白，与预期值相符合；Western blot分析表明表达的重组E2蛋白可以与抗BVDV抗体发生免疫学反应，证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性。3.重组E2蛋白的纯化及间接ELISA方法的初步建立。从三种重组蛋白中选择了表达量最高，反应原性强的重组E2蛋白，对其进行纯化，用纯化的E2重组蛋白为包被抗原，初步建立了间接ELISA检测方法。通过检测，证实所建立的间接ELISA检测方法具有较好的特异性与敏感性。