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目的 观察具有免疫抑制和抗炎作用的中药雷公藤主要活性成份——雷公藤甲素对体外培养的人眼球后成纤维细胞(retroocular fibroblasts,RFs)的增殖、外源性细胞因子——重组人γ-干扰素(IFN-γ)刺激后RFs表达细胞粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、人类白细胞抗原(Human leucoctye antigen,HLA)-DR(HLA-DR)、CD40以及透明质酸(hyaluronic acid,HA)、Ⅰ型胶原蛋白合成的影响。 方法 1.RFs的培养与鉴定。眼球后结缔组织取自正常人,取材后立即送实验室并无菌条件下对组织进行体外培养,实验所用细胞在2~8代间。采用倒置相差显微镜和免疫细胞化学染色对培养的细胞进行鉴定。 2.RFs与不同浓度的雷公藤甲素(0-100μg/L)共同孵育48小时后,MTT法检测雷公藤甲素对RFs的增殖的影响。 3.RFs与外源性细胞因子——重组人IFN-γ(100U/mL)以及不同浓度的雷公藤甲素(0-10μg/L)共同孵育48小时后,放射性免疫法和免疫细胞化学染色检测IFN-γ和雷公藤甲素对透明质酸和Ⅰ型胶原蛋白合成的影响。 4.RFs与IFN-γ(100U/mL)以及不同浓度的雷公藤甲素(0-10μg/L)共同孵育48小时后,流式细胞仪检测IFN-γ对RFs表达ICAM-1、HLA-DR和CD40状况的影响,以及雷公藤甲素干预后的表达情况。 结果 1.培养的细胞形态上呈成纤维原细胞型,且表达纤维原细胞的标记波形蛋白,同时不表达细胞角蛋白,提示培养的细胞内为纯净的纤维原细胞。 2.雷公藤甲素对RFs的增殖有明显抑制作用,并随剂量增大而抑制作用加强,当雷公藤甲素剂量增至100μg/L时,RFs的增殖受到完全抑制。 3.外源性细胞因子IFN-γ刺激后,能够显著刺激透明质酸和胶原蛋白的合成、分泌,而雷公藤甲素干预后,透明质酸和胶原蛋白的分泌合成受到明显的抑制。 4.IFN-γ能显著诱导RFs过度表达ICAM-1、HLA-DR、CD40等免疫调节因子(P<0.01)。雷公藤甲素干预后,ICAM-1、HLA-DR、CD40的过度表达均受到明显的抑制。 结论 雷公藤甲素能够抑制外源性细胞因子IFN-γ的诱导作用,降低RFs的生物活性,从而有助于减少Graves’眼病的免疫损伤。