脂餐负荷前后ox-LDL和PON1变化及其与动脉硬化关系的研究

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目的:研究空腹状态及脂餐负荷后不同时点血清ox-LDL、PON1动态变化,以及与动脉粥样硬化进展的关系。方法:选取体重2.4-3.0 kg健康新西兰雄兔10只,普通饲料适应性饲喂1周后给予高脂饮食(含1%胆固醇+10%蛋黄+89%普通饲料)12周,在高脂饮食初始及第4、8、12周分别禁食禁水8小时(hour,h)后给予脂餐负荷(含2%胆固醇+20%蛋黄+78%普通饲料),并分别于空腹及负荷后第2、4、6、8h经耳缘静脉采血,离心后取上清液于EP管,-70℃液氮冰箱保存。待血样采集结束后,测定血浆ox-LDL和PON1的浓度。在高脂饮食初始及第4、8、12周,应用6-15MHz(兆赫)高频探头检测观察兔腹主动脉硬化情况。12周后处死动物,从升主动脉至腹主动脉分离动脉,经固定、取材、制片、HE染色后,显微镜下观察动脉血管横断面硬化情况。结果:1.AS进程中空腹状态及脂餐负荷后ox-LDL的动态变化动脉硬化(atherosclerosis,AS)进程中,空腹ox-LDL水平逐渐升高(P<0.05),8w最高;高脂饮食初始,负荷后2h最高(P<0.05);4、8w时,负荷后2h最高(P>0.05);12w时,负荷后4h最高(P>0.05)。2.AS进程中空腹状态及脂餐负荷后PON1的动态变化AS进程中,空腹PON1活性逐渐升高(P<0.05),12w最高;高脂饮食初始,负荷后4h最高(P<0.05);4w时,负荷后6h最高(P>0.05);8w时,负荷后6h最高(P>0.05);12w时,负荷后6h最高(P<0.05)。3.不同时期超声观察兔腹主动脉的结果在AS进程中兔腹主动脉的变化为:初始时腹主动脉管壁光滑;4周时动脉内膜略增厚;8周时内膜进一步增厚、管壁粗糙;12周时腹主动脉内-中膜增厚明显,管壁可见强回声斑块附着,提示动脉硬化程度逐渐加重。4.AS进程中ox-LDL在各时点的变化与AS的关系(1)4W时,在脂餐负荷前后各个时间点,AS随ox-LDL浓度降低而加重,餐后6 h、8 h有意义(P<0.05);(2)8w时,在空腹状态AS随其浓度降低而加重,负荷后各时点AS随其浓度增高而加重,尚不认为有意义(P>0.05);(3)12w时,除餐后8h外余各时点AS随其浓度增加而加重,尚不认为有意义(P>0.05)。5.AS进程中PON1在各时点的变化与AS的关系(1)4W时,在各时点AS均随PON1活性升高而加重,即呈正相关,尚不能认为有意义(P>0.05);(2)8w时,在各时点AS均随其活性减弱而加重,即呈负相关,尚不能认为有意义(P>0.05);(3)12w时,除空腹和负荷后6h时AS随其活性减弱而加重外,其余时点AS随其活性升高而加重,尚不认为有意义(P>0.05)。6.肉眼观察腹主动脉变化初始时,管壁光滑;12W后,管壁可见凸出管腔的斑块附着。7.病理观察腹主动脉初始时,腹主动脉内膜光滑、连续,未见泡沫细胞形成;12W后腹主动脉内膜层明显变厚,管壁呈帽状隆起,可见纤维帽形成,平滑肌细胞连接疏松、增生显著,并可见大量泡沫细胞,有的极度膨大呈明显的“空浆现象”。结论:1.动脉硬化进展中,空腹状态ox-LDL、PON1水平逐渐升高,可能与机体氧化抗氧化逐渐加强且在逐渐增高的水平维持动态平衡有关。2.动脉硬化早期ox-LDL负荷后2h最高,12周时负荷后4h最高;动脉硬化进展中负荷后PON1降低,4W时负荷后8h最低,12W时负荷后4h最低。提示动脉硬化中期,抗氧化能力在负荷后8h最弱,动脉硬化后期负荷后4h抗氧化能力最低。
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