不同灸温调脂通脉效应及TRPV1介导灸法“以温促通”效应机制研究

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研究目的:本课题理论研究部分,通过对古今文献的研究,探讨灸温是影响灸效的关键因素,适宜灸温是取得最佳灸效的重要前提,为下一步灸法“温通”效应机制研究提供理论基础;临床试验部分通过观察不同灸温对高脂血症患者血脂及血清Ox-LDL、ET-1、NO的影响,探讨不同灸温对高脂血症的“温通”效应,观察其能否通过调整血脂组分、抗氧化、保护血管内皮、改善血管舒缩功能、预防AS等不同病理环节体现;动物实验通过观察温度感受器TRPV1的激动剂capsaicin和拮抗剂capsazepine对高脂血症C57BL/6小鼠血脂及背根节TRPV1mRNA表达的影响,从阴性对照和阳性对照两个方面证实TRPV1介导了灸法以“温”促“通”效应机制。方法:理论研究:检索与本课题相关的古今文献资料,包括灸温、灸感、灸效、灸法作用机制、高脂血症、TRPV1,综合分析,归纳总结上述资料之间及与本课题之间的相关性,从不同方面为灸法“温通”效应机制研究奠定理论基础。临床试验:将42例原发性高脂血症患者随机分为45℃组和38℃组,用不同的艾灸温度艾灸患者神阙穴及足三里穴,每次每穴10分钟,隔日一次,治疗12周,肘静脉抽血观察治疗前后患者血脂、血清Ox-LDL、ET-1、NO的变化及组间疗效的差异。动物实验:分题一,将32只清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、46℃组、38℃组4组,每组8只。自制75%蛋黄乳剂25m1/kg腹腔注射,建立急性高脂血症模型。两次治疗结束后即刻取材,全自动生化分析仪检测血脂,荧光定量PCR法检测小鼠背根节TRPV1mRNA的表达量;分题二,将40只清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、46℃组、46+CPZ组、46+溶媒组5组,每组8只。造模方法同分题一,46+CPZ组在治疗前需涂抹capsazepine,46+溶媒组在治疗前涂抹溶媒剂,其它组处理同分题一,两次治疗结束后即刻取材,检测指标及方法同分题一;分题三,将48只清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、46℃组、38℃组、CAP组、溶媒组6组,每组8只。造模及治疗方法同分题一,CAP组只涂抹capsaicin不治疗,溶媒组只涂抹不治疗,其它组处理同分题一,两次治疗结束后即刻取材,检测指标及方法同分题一。结果:临床试验:1温、热、灼、痛四种不同灸感对应的温度范围有别,“温”的温度范围大概在32.8℃~35.8℃;“热”的温度范围大概在36.8℃~39.9℃;“灼”的温度范围大概在40.9℃~43.5℃;“痛”的温度大概大于等于44.5℃。2治疗后两组组间比较,45℃组降低了高脂血症患者血清中TC、TG、Ox-LDL的含量及ET-1/NO的比值,明显优于38℃组(P<0.05或者P<0.001)。同时,45℃组升高了高脂血症患者血清中NO的含量,明显优于38℃组(P<0.05)。345℃和38℃对于血清中Ox-LDL的含量均有明显的降低作用,但38℃组对NO、ET-1、ET-1/NO无明显影响,而45℃组作用明显,说明38℃艾灸对也具有一定的治疗作用,但其作用途径与45℃可能存在着区别。动物实验:4与模型组比较,46℃组TC降低明显,差异具有显著性统计学意义(P<0.05),与46℃组比较,38℃组TC含量明显较高,差异具有显著性统计学意义(P<0.05)。46℃组TRPV1mRNA的表达量是模型组的2.62倍,38℃组TRPV1mRNA的表达量是模型组的1.78倍,46℃组TRPV1mRNA的表达量是38℃组的1.47倍。5与46℃组相比,46+CPZ组TC的含量与明显高于46度组(P<0.05),说明capsazepine拮抗了46℃艾灸的降脂效应。46℃组TRPV1mRNA的表达量是模型组的2.62倍,46+CPZ组TRPV1mRNA的表达量是模型组的1.59倍,说明capsazepine拮抗了46℃艾灸产生的TRPV1mRNA的表达。6与模型组比较,46℃组、CAP组TC的含量明显降低,且差异有显著统计学意义(P<0.05),CAP组降TC的效应与46℃组降TC的效应从统计学上讲无差异(P>0.05)。46℃组TRPV1mRNA的表达量与CAP组TRPV1mRNA的表达量相同,是模型组的2.62倍,优于38℃组。理论研究:7灸感是艾灸起效的关键;温、热、灼、痛是灸感的主要表现形式;适宜的灸量是灸感、灸效产生的重要条件;灸温是不同施灸强度产生的综合灸量,适宜灸温是取得最佳灸效的重要前提。艾灸的作用机理与燃艾时所产生的理化因子有关,如穴位局部感受器、热休克蛋白、肥大细胞脱颗粒等,这些因子都会受到温度的影响,进而产生相应的生物学变化。结论:临床研究:1“温、热、灼、痛”四种不同的灸感对应不同的温度范围,分别是32.8℃~35.8℃.36.8℃~39.9℃.40.9℃~43.5℃.大于等于44.5℃,灸感与温度密切相关。245℃艾灸刺激具有调脂作用,不同程度地降低了血清中的TC.TG.ApoB.LDL-c的含量,同时明显升高了HDL-C的含量;显著降低了高脂血症患者血清中Ox-LDL的含量,具有抗氧化作用;明显降低了高脂血症患者血清中ET-1含量及降低ET-1/NO比值,同时升高了NO含量,具有保护血管内皮功能作用。338℃艾灸刺激调脂作用不明显;但可以显著降低高脂血症患者血清中Ox-LDL的含量,具有抗氧化作用;对ET-1、NO的含量及ET-1/NO比值影响不大,保护血管内皮功能作用不明显。4两组比较,45℃艾灸刺激调脂效应、抗氧化效应及保护血管内皮作用明显较佳。艾灸具有温通调脂作用,“温”是条件,即需达到一定的温度条件,45℃较38℃好,“通”是效应,艾灸刺激达到条件后才会产生较好的调脂通脉效应。动物研究:146℃艾灸刺激在降低TC的同时,明显增加了TRPV1mRNA的表达量,不同于38℃。2局部应用Capsazepine竞争性的拮抗了46℃艾灸热刺激产生的调脂作用,同时也抑制了艾灸热刺激产生的小鼠背根节TRPV1mRNA表达量。346℃艾灸刺激同Capsaicin一样,均可以激活TRPV1,并产生同样的调脂作用。4TRPVl介导了灸法以“温”促“通”效应机制,适宜的灸量既要激活TRPV1,同时又可使病人能耐受,即是43℃-45℃。理论研究:1灸感是艾灸起效的关键。2温热灼痛感是灸感的主要表现形式。3适宜的灸量是灸感、灸效产生的重要条件。4灸温是不同施灸强度产生的综合灸量,适宜灸温是取得最佳灸效的重要前提。
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