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黑龙江林蛙(Rana amurensis Boulenger)主产于黑龙江境内,黑龙江林蛙具有极高的经济价值。近些年来,人们过度砍伐树木,造成森林资源的大范围破坏,使得黑龙江林蛙的生活环境遭到破坏。同时随着人们生活水平的提高,越来越多人发现林蛙的特殊功效,对黑龙江林蛙及其制品需求日益增多,于是开始大量捕捉,使得野生黑龙江林蛙数量急剧减少。因此揭示黑龙江林蛙群体内遗传多样性水平,为我们保护黑龙江林蛙种质资源提供依据,对林蛙产业的可持续发展、保护生物多样性、维护生态平衡均具有重大的意义,同时也为黑龙江林蛙遗传育种提供基础。另一方面,人们也开始了黑龙江林蛙的人工养殖,如果想提高黑龙江林蛙养殖经济效益,就应当探索出提高雌性比例的有效途径,人们主要需求的还是雌性黑龙江林蛙,如果在断尾期就能分辨出雌雄个体,就能大大减少饲养成本,这是林蛙养殖业中一个有待解决的问题。为了从根本上解决这些问题,我们必须准确鉴定雌雄性别。
本试验采用RAMP(Random anplified microsatellite polymorphism)分子遗传标记,对采集于黑龙江省方正地区的84只野生黑龙江林蛙(雌性)进行了遗传多样性分析,并运用RAPD分子遗传标记,采用尾分析法对96只黑龙江林蛙个体进行了性别鉴定试验。本论文主要研究结果如下:(1)被测材料间RAMP标记多态性较高。18个引物组合共产生87条DNA扩增片断,其中71条具有多态性,PPB为81.61％。每个引物可扩增出3~7个DNA片段,平均扩增出4.8条片段。遗传相似系数(GS)的变化范围0.402~0.862,平均值为0.676,Nei氏基因多样度为0.4022。通过本试验可以得出黑龙江林蛙种质资源在分子水平上存在较大的遗传差异,RAMP分子标记是评价黑龙江林蛙资源遗传多样性的有效方法。(2)通过筛选220条随机引物,最终在随机引物G5、15的PCR产物找到雌雄差异。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳得到了大约250bp与大约1000bp的特异条带,并在随机个体中得到验证。扩增出来的能区分雌雄的特殊差异带,是否为黑龙江林蛙的性别决定的主效基因还要做进一步的研究。(3)本试验同时选用5对CHD引物组合,但未能达到鉴定黑龙江林蛙性别的目的。
本试验采用RAMP(Random anplified microsatellite polymorphism)分子遗传标记,对采集于黑龙江省方正地区的84只野生黑龙江林蛙(雌性)进行了遗传多样性分析,并运用RAPD分子遗传标记,采用尾分析法对96只黑龙江林蛙个体进行了性别鉴定试验。本论文主要研究结果如下:(1)被测材料间RAMP标记多态性较高。18个引物组合共产生87条DNA扩增片断,其中71条具有多态性,PPB为81.61％。每个引物可扩增出3~7个DNA片段,平均扩增出4.8条片段。遗传相似系数(GS)的变化范围0.402~0.862,平均值为0.676,Nei氏基因多样度为0.4022。通过本试验可以得出黑龙江林蛙种质资源在分子水平上存在较大的遗传差异,RAMP分子标记是评价黑龙江林蛙资源遗传多样性的有效方法。(2)通过筛选220条随机引物,最终在随机引物G5、15的PCR产物找到雌雄差异。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳得到了大约250bp与大约1000bp的特异条带,并在随机个体中得到验证。扩增出来的能区分雌雄的特殊差异带,是否为黑龙江林蛙的性别决定的主效基因还要做进一步的研究。(3)本试验同时选用5对CHD引物组合,但未能达到鉴定黑龙江林蛙性别的目的。