葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase,EC 1.1.3.4,GOD）是一种黄素依赖型氧化还原酶,它能专一的催化β-D-葡萄糖分解成葡萄糖酸内酯和过氧化氢。葡萄糖氧化酶在纺织业、畜牧业、食品业、医疗医药业等众多领域均有广泛的应用。目前食品级葡萄糖氧化酶的工业生产产量不高,发酵副产物比较多,不利于分离纯化,这些问题对食品级葡萄糖氧化酶的发酵生产产生了不利影响。本文选择黑曲霉CBS513.88的葡萄糖氧化酶基因之一goxC,通过密码子优化、信号肽替换对GOD编码区进行改造,提高发酵液酶活;同时以实验室前期构建的低蛋白背景菌黑曲霉SH2和HL1为出发菌株,利用营养缺陷标记pyrG构建葡萄糖氧化酶表达载体系统,进一步提高GOD的分泌表达。主要结论包含以下几方面:（1）以SH2为宿主的葡萄糖氧化酶重组表达:从NCBI中找到Aspergillus niger CBS513.88中葡萄糖氧化酶相关的4个基因,通过文献查找、BLAST分析及进化树分析选择goxC基因,以SH2为宿主构建GOD重组菌株。通过邻联茴香胺-过氧化氢酶法,测转化子的酶活,发现SH2-goxC5号转化子酶活最高,在第7d时可达563.8 U/mL;50L上罐发酵在179h时酶活为最高,高达1128 U/mL,相比摇瓶提高了2倍多。（2）以HL1为宿主的葡萄糖氧化酶重组表达:为了探究敲除转录因子prtT及一系列淀粉酶对黑曲霉发酵培养中营养物质利用的影响,以未敲除prtT基因的HL1作为出发菌来构建葡萄糖氧化酶高效表达重组菌株,筛选出表达量最高的HL1-goxC9号转化子,达到635.1U/mL。同时通过0%⁵%葡萄糖浓度的摇瓶发酵并检测酶活探究葡萄糖浓度对发酵的影响,发现0%葡萄糖浓度的摇瓶在72h时酶活力达到最高为658.3 U/mL,1%葡萄糖浓度的摇瓶在120h时酶活力达到了599.3 U/mL,发现随着培养基中葡萄糖浓度的提高,达到最高酶活的小时数也随之延长。（3）葡萄糖氧化酶酶学性质研究:通过亲和层析纯化葡萄糖氧化酶,并通过SDS-PAGE发现葡萄糖氧化酶分子量大小为80kDa左右,去糖基化后发现其分子量大小降为65kDa左右,说明重组葡萄糖氧化酶含有糖基化修饰。重组葡萄糖氧化酶最适pH为5.5,最适温度为40℃。同时在10 mmol/L浓度下,Ni⁺、Ca²⁺、K⁺、Zn²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺增加葡萄糖氧化酶的活力;EDTA、Fe³⁺对葡萄糖氧化酶酶活影响很小;SDS或Na⁺明显降低葡萄糖氧化酶活力。在100 mmol/L浓度下,SDS、Ni⁺、K⁺、Mn²⁺使葡萄糖氧化酶活力增加;EDTA、Na⁺明显降低葡萄糖氧化酶活力;Ca²⁺、Zn²⁺、Fe³⁺、Mg²⁺对葡萄糖氧化酶酶活影响很小。