论文部分内容阅读
目的:探讨七氟烷后处理对体外循环(CPB)犬肺功能、肺组织细胞凋亡情况及p-akt、cleaved-caspase3表达的影响,评价PI3K/Akt信号通路在七氟烷后处理减轻CPB犬肺损伤中的作用。方法:实验用健康杂种犬24只,随机分为4组(n=6),假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟烷后处理组(S组)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂组(S+W组)。C组行机械通气,胸骨正中开胸,其余不做任何处理,I/R组建立CPB左肺缺血再灌注损伤模型,S组在开放左肺动静脉即刻行2%七氟烷后处理30min,S+W组在开放左肺动静脉前10分钟给予PI3K抑制剂wortmannin 0.16mg·kg-1泵注,开放左肺动静脉即刻行2%七氟烷后处理30min。于开胸前(T1)、开放左肺动静脉即刻(T2)及停机后2h(T3)取肺左下叶组织光镜下观察病理学变化,同时在各时点采集股动脉血,行动脉血气分析,计算呼吸指数(RI)和氧合指数(OI),采用蛋白质印迹法(western blotting)检测各时点肺组织p-Akt、cleaved-caspase3的表达,TUNEL法检测各时点肺组织细胞凋亡情况。结果:(1)各组犬呼吸参数的变化:T1时点各组犬RI和OI无明显差异(P>0.05);与T1时点比较,C组各时点RI及OI无统计学意义,I/R组、S组及S+W组T2、T3 RI明显增加,OI明显降低(P<0.05);与T2比较,T3时点I/R组、S组及S+W组与I/R组RI明显增加,OI则相反(P<0.05)。四组同时点比较,与C组比较,T2、T3时点I/R组、S组及S+W组RI明显增加,OI明显降低(P<0.05);与I/R组T3时点比较,S组RI降低,OI增加(P<0.05),S+W组RI和OI差异无统计学意义(P>0.05);与S组T3时点比较,S+W组RI增加,OI降低(P<0.05)。(2)四组犬肺组织光镜下病理改变:开胸前(T1时点),四组犬肺组织的结构清晰,肺泡腔内未见渗出,肺泡壁完整光滑,是正常肺组织结构;开放左肺动静脉后(T2时点),C组肺组织变化不明显,其他三组肺组织部分出现了肺泡毛细血管扩张,少量炎性细胞浸润;实验结束时(T3时点),C组肺泡壁光滑完整,偶见炎性细胞,I/R与S+W组肺组织结构紊乱,肺泡壁断裂,肺泡腔塌陷并可见明显的红细胞以及大量炎性细胞浸润;S组部分肺泡壁断裂,少量炎性细胞及少量红细胞渗出。(3)四组犬肺组织p-Akt、cleaved-caspase3的表达:开胸前各组犬p-Akt和cleaved-caspase3表达量极少,无明显差异(P>0.05);与T1时点比较,C组各时点p-Akt,cleaved-caspase3表达无明显差异(P>0.05),其余三组T2、T3时点肺组织p-Akt,cleaved-caspase3的表达明显升高(P<0.05)。四组同时点比较,与C组比较,T2、T3时点R组、S组及S+W组肺组织p-Ak,cleaved-caspase3的表达增加(P<0.05);与I/R组比较,T3时点S组p-Akt表达增加(P<0.05),cleaved-caspase3表达降低(P<0.05),而S+W组差异无统计学意义(P>0.05);与S组T3时点比较,应用PI3K阻断剂后S+W组p-Akt表达降低,cleaved-caspase3增加(P<0.05)。(4)四组犬肺组织凋亡情况:与T1时点比较,C组各时点无明显差异(P>0.05),其余三组T2、T3时点肺组织凋亡细胞数目增多,凋亡指数上升(P<0.05);T3时点各组凋亡指数明显高于T2时点(P<0.05)。四组同时点比较,与C组比较,I/R组、S组及S+W组T2、T3时点凋亡指数较C组高;与I/R组比,T3时点S组与S+W组凋亡指数明显降低(P<0.05,);应用阻断剂后,S组T3时点比S+W组凋亡指数降低(P<0.05)。结论:七氟烷后处理可改善CPB后的肺功能,减少肺组织细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号通路激活后上调p-Akt水平,抑制cleaved-caspase3的表达有关。