论文部分内容阅读
目的：本课题拟建立青少年豚鼠透镜诱导近视模型，采用温肾益精近视方干预，2周后检测各组屈光度和眼轴参数， MMP-2、TIMP-2、RAR-β、IGF-I、IGF-Ⅱ在球壁后极部各层的表达，探索中药能否干预近视眼球重塑及机制。方法：研究分三部分开展，第一部分通过查阅古籍文献和相关中医药文献阐述中医理论体系对近视的认识及治疗方法，探讨温肾益精法的中医理论与近视治疗的理论依据，温肾益精法组方治疗近视的方义及理论依据。第二部分探讨温肾益精近视方对豚鼠凹透镜诱导近视屈光状态、眼轴及视网膜电图的影响，采用英国种3周龄三色豚鼠作为实验动物；实验动物随机分为五组：组Ⅰ空白对照组；组Ⅱ近视模型对照组；组Ⅲ低剂量灌药组；组Ⅳ中剂量灌药组；组Ⅴ高剂量灌药组，应用-6D凹透镜产生视网膜远视性离焦的方法诱导建立近视动物模型；在诱导过程中组Ⅲ、组Ⅳ、组Ⅴ分别给予低、中、高不同浓度剂量温肾益精方灌胃；2周后分别测定屈光度、眼轴和闪光视网膜电图检测，观察温肾益精方对实验性近视豚鼠屈光度、眼轴和视功能的影响。第三部分：采用免疫组化、PCR、ELISA技术检测温肾益精近视方对豚鼠透镜诱导近视眼视网膜、脉络膜、巩膜RAR-β、IGF-Ⅰ、Ⅱ、MMP-2、TIMP-2表达的影响，探讨温肾益精法对透镜诱导豚鼠近视的分子生物学作用机制。结果：采用-6D凹透镜产生远视性光学离焦可成功诱导豚鼠产生近视；同步温肾益精方干预后实验性近视豚鼠屈光度和眼轴参数组间比较差异无统计学意义；通过闪光视网膜电图检查，中药干预组a、b及总振幅优于单纯凹透镜诱导组，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。透镜诱导近视眼免疫组化可见视网膜、脉络膜、巩膜有RAR-β、IGF-Ⅱ、MMP-2、TIMP-2表达，但网膜上述表达少，在巩膜、脉络膜上有较强表达，RAR-β、MMP-2、透镜诱导组在巩膜上表达强于对照组。 MMP-2、TIMP-2在各组各层均有表达，结果提示中药干预、凹透镜诱导和正常组MMP-2/TIMP-2比值有差异，MMP-2/TIMP-2比值干预眼均大于对照眼，说明基质分解活跃，凹透镜诱导远视离焦可致眼球重塑。采用实时荧光PCR检测发现巩膜层RAR-β、MMP-2表达透镜组高于正常对照组，中药干预各组间差异无统计学凹透镜诱导眼巩膜IGF-Ⅱ实时荧光定量PCR结果各组均下调，但高剂量中药干预组（组Ⅴ）表达高于组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ，差异有统计学意义。结论：一、温肾益精法干预不能改变远视光学离焦诱导豚鼠近视的眼轴延长，高剂量组可改善近视眼视网膜功能。二、高剂量组温肾益精方干预可降低MMP-2、RAR-β在巩膜上表达，相对提高IGF-ⅡmRNA在巩膜上表达。三、免疫组化检测到凹透镜诱导眼视网膜、脉络膜、巩膜有RAR-β、MMP-2、TIMP-2表达，在巩膜上有较强表达，RAR-β、MMP-2表达均强于对照组，TIMP-2表达均弱于对照组。四、凹透镜诱导组巩膜、脉络膜层均发现MMP-2/TIMP-2比值较正常升高，巩膜层比值最高。