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缺氧缺血性脑损伤(hypoxia—ischemicbrain damage, HIBD)在新生儿期是引起新生儿死亡和神经系统损伤最常见的原因。据统计每1000例新生儿中约有1、2例由于围产期窒息引起HIBD,HIBD患儿中大约有15-20%在新生儿期死亡,约25%幸存患儿会遗留神经系统损伤,如脑性瘫痪、智力障碍、癫痫等。目前对HIBD以对症支持治疗为主,亚低温和高压氧疗法已经得到广泛的认可,亚低温疗法对中度HIBD效果显著,可明显预防和减轻患儿后遗症的发生,提高生存质量。20年前人们普遍认为与其它器官的再生能力相比,大脑组织在发育完全后,几乎无再生成神经细胞的能力,但是近年来的研究发现,在大脑的特殊区域存在着神经干细胞(NSCs),脑组织具有神经再生的能力。神经干细胞是在胚胎和成体神经组织中存在的具有自我更新和多向分化潜能的细胞,能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,参与神经发育和神经损伤的修复。另外,近几年的研究表明中枢神经存在许多抑制因子,成年哺乳动物周围神经轴突损伤后能够广泛再生,而中枢神经轴突的再生能力有限,其原因除了与损伤点生长促进分子缺乏、损伤神经元内在的生长能力差和胶质斑痕的物理屏障作用外,微环境中抑制因子的存在起着重要作用,如Nogo-A,它是一个重要的中枢轴突生长抑制因子,它对中枢神经损伤的抑制作用已被体内外实验证实。脑损伤患儿早期脑的可塑性比较大,因此最大限度的激发内源性神经干细胞的产生,促进其增殖与分化成为近几年来研究的热点。目的本实验制作缺氧缺血性脑损伤大鼠动物模型,运用头皮位点药物注射对其治疗,研究头皮位点药物注射对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞增殖分化及对神经再生抑制因子Nogo-A mRNA表达的影响。方法缺氧缺血性脑损伤大鼠模型制备：新生7日龄SD大鼠,随机分成四组：对照组,模型组,位点注射生理盐水治疗组,位点注射VitB1、B12治疗组。采用结扎左侧颈总动脉并吸人2小时氮氧混合气,制作新生大鼠HIBD模型。位点注射生理盐水治疗组和位点注射VitB1、B12治疗组在模型建立后第14天,分别在大鼠的左侧额顶叶皮下注射等量的生理盐水和VitB1、VitB12的混合稀释液,1次/天,共20天,假手术组和模型组不予处理。各组予干预后7天后处死动物：用40g/L多聚甲醛心脏灌注后断头取脑组织,分别做连续冠状切片。用HE染色做病理学分析,用免疫荧光方法测定各组大鼠海马神经干细胞标志物巢蛋白(Nestin)表达情况,免疫组织化学方法检测海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,用原位杂交方法测定海马神经再生抑制因子Nogo-A mRNA的表达情况。统计学处理应用SPSS16.0统计软件进行分析,数据以X士S表示,多组均数比较用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法,以a=0.05为检验水准,P<0.05差异有统计学意义。结果1.HE染色显示：位点注射可减轻海马神经细胞的变性坏死,促进其修复,其中注射VitB1、B12治疗组修复作用更为明显。2.位点注射可增加海马Nestin的表达,以注射VitB1、B12治疗组表达最高,对照组组表达最少。3.海马NSE免疫组化显示：对照组和和位点注射VitB1、B12治疗组表达较多,二者差别较小,而模型组海马表达最少(P<0.005)。海马GFAP免疫组织化学显示对照组表达最少,模型组最多,位点注射生理盐水和位点注射VitB1、B12可抑制GFAP的表达,其中以位点注射VitB1、B12治疗组的抑制作用最为明显(P<0.005)。4.原位杂交显示：对照组的Nogo-A mRNA表达最少,而模型组表达与其相反,位点注射生理盐水治疗组和位点注射VitB1、B12治疗组的表达水平均低于模型组,其中位点注射VitB1、B12治疗组更为明显(P<0.005)结论运用头皮位点药物注射治疗大鼠外观形态脑瘫表现好转,神经损伤减轻；运用位点药物注射治疗组Nestin及NSE增多,但是GFAP及Nogo-A mRNA的表达减少。从而得出结论：头皮位点注射治疗可促进内源性神经干细胞的增殖与分化,抑制Nogo-A mRNA的表达,促进神经的再生与修复,位点注射时联合运用药物,能增强这种治疗效果。