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研究背景及目的胶质瘤是发病率最高的成人颅内恶性肿瘤,而其发病机制尚未完全明确。NLRP3与多种肿瘤的发生发展密切相关,但其作用与机制在不同报道中并不一致。胶质瘤中NLRP3的表达情况与作用机制尚未见报道,为探究NLRP3在胶质瘤中的作用,本研究检测了人胶质瘤组织中NLRP3的表达情况,并就NLRP3对胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的作用及可能的分子机制进行探讨。材料与方法1.NLRP3炎性小体在人脑胶质瘤组织中的表达差异。应用免疫组化技术检测39例胶质瘤组织中NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1β的表达水平差异,数据采用Spearman秩相关分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。2.NLRP3影响人胶质瘤细胞功能及其机制的初步研究。构建特异性敲低细胞内NLRP3的si-RNA序列及过表达NLRP3质粒载体,分别转染胶质瘤细胞SHG44及A172,Western Blot验证其有效性后,经克隆形成、CCK-8、EdU细胞增殖检测实验、流式细胞术、划痕实验、Transwell细胞迁移及侵袭实验,研究NLRP3低表达/高表达胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭功能的变化;通过Western Blot技术,检测ASC、caspase-1、IL-1β以及 EMT 相关的 E-Cadherin、ZO-1、Claudin-1、N-Cadherin、vimetin 及转录因子Snail是否因细胞内NLRP3表达水平的改变而发生变化,从而对NLRP3影响胶质瘤细胞功能的分子机制进行初步研究。结果1.NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1 β的组织表达水平与胶质瘤病理级别呈显著正相关。NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1 β在高级别胶质瘤组织中较低级别胶质瘤组织中表达水平上调,经Spearman秩相关检验,NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1 β的组织表达水平与胶质瘤WHO病理分级呈显著正相关。2.NLRP3促进胶质瘤细胞的增殖、抑制凋亡、促进迁移与侵袭。(1)构建NLRP3特异性si-RNA及表达NLRP3的质粒载体,分别转染胶质瘤细胞系SHG44与A172,经Western Blot技术验证NLRP3低表达/高表达的胶质瘤细胞模型构建成功;(2)敲低NLRP3能够促进胶质瘤细胞的凋亡、抑制其增殖、迁移与侵袭,过表达NLRP3则表现出相反的效果,表现为抑制胶质瘤细胞的凋亡、促进其增殖、迁移与侵袭;(3)胶质瘤细胞中NLRP3表达被敲低后,ASC、pro-caspase-1及其活化剪切后亚基P20、pro-IL-1 β及其成熟形式IL-1 β的蛋白表达水平随之降低,同时细胞内 E-Cadherin、ZO-1 及 Claudin-1 表达增加,N-Cadherin、vimetin 及 snail下调;而过表达NLRP3后胶质瘤细胞内上述分子蛋白水平呈现相反的变化趋势。结论1.NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1 β的组织表达水平与胶质瘤病理级别呈显著正相关。2.NLRP3通过抑制胶质瘤细胞凋亡、促进增殖、迁移与侵袭,在胶质瘤的发生发展中起作用。3.NLRP3在胶质瘤中的作用可能与NLRP3炎性小体活性的变化以及NLRP3调控胶质瘤细胞发生EMT有关。