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目的:胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,恶性程度高,预后极差。如何对胶质瘤进行有效的治疗,延缓胶质瘤患者生存期一直是研究的重点。中枢神经系统肿瘤最新分类首次整合了组织学表型和基因分子表型,以进行更加有效和精准的治疗。目前越来越多的研究认为miRNAs是潜在的预后生物标志物和治疗靶点。成熟的miRNA与其靶信使RNA 3’UTR在一定的配对基础上,对靶m RNA的翻译过程进行调节,调控细胞分化、增殖等相关的活动,进而影响了肿瘤的变化趋势。HOTAIR是第一个被发现具有反式调节功能的lnc RNA。HOTAIR表达在胶质瘤中表达上调,HOTAIR高表达提示预后不良。本研究将检测人脑胶质瘤组织和正常人脑组织中miR-15b的表达水平,解析miR-15b在临床胶质瘤分子诊断及预后判断中的作用,阐述miR-15b、HOTAIR及p53之间的调控关系及其对胶质瘤表型的影响,为开发基于miR-15b/HOTAIR/p53环路的胶质瘤基因治疗提供实验基础和理论依据。方法:收集具有明确病理分级的胶质瘤标本及正常人脑组织(来源于脑外伤行内减压术患者)。采用q RT-PCR检测miR-15b在胶质瘤组织中的表达水平,研究miR-15b在胶质瘤中的作用,及其对胶质瘤患者临床诊断和预后判断的意义。建立miR-15b上调和下调的胶质瘤细胞模型,探讨miR-15b对胶质瘤细胞恶性表型的影响。采用生物信息学软件分析miR-15b潜在靶基因,荧光素酶报告基因、Western blot法进行验证。随后,采用RNA杂交软件分析miR-15b与HOTAIR的关系,发现HOTAIR序列包含miR-15b的结合位点,荧光素酶报告基因进一步验证RNA杂交分析的结果。建立miR-15b/HOTAIR/p53不同表达状态的胶质瘤细胞模型,单独或联合干预miR-15b/HOTAIR/p53环路的关键节点,观察胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭等细胞生物学表型变化,明确miR-15b/HOTAIR/p53之间的相互调控关系。结果:(1)与正常脑组织相比,miR-15b在脑胶质瘤组织中的表达明显降低。miR-15b在高级别胶质瘤组织(III-IV级)的表达水平明显低于低级别胶质瘤组织(I-II),miR-15b表达水平与胶质瘤病理级别负相关,提示miR-15b可能与胶质瘤恶性程度相关。miR-15b表达水平与KPS评分和WHO级别密切相关,与患者性别、年龄等临床特征无明显差异;(2)miR-15b的低表达水平与胶质瘤的整体生存期缩短密切相关,提示miR-15b可能是胶质瘤恶性进展的内在因素;(3)q RT-PCR检测结果发现miR-15b在胶质瘤中低表达,而Cripto-1高表达,二者呈负相关。过表达miR-15b可显著降低胶质瘤细胞中Cripto-1的蛋白表达水平。生物信息学软件预测Cripto-1 3?UTR存在miR-15b结合位点。荧光素酶报告基因检测证实miR-15b与Cripto-1基因的3?UTR特异性结合,提示Cripto-1是miR-15b的靶基因。miR-15b通过靶向Cripto-1诱导胶质瘤细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭能力;(4)过表达miR-15b可抑制胶质瘤细胞中HOTAIR的表达水平,而通过HOTAIR si RNAs下调HOTAIR的表达,也可显著上调miR-15b的表达量。采用RNA杂交软件分析miR-15b与HOTAIR的关系,发现HOTAIR序列包含miR-15b的结合位点。双荧光素酶报告法证实HOTAIR序列中确实存在miR-15b结合位点,一旦假定的结合位点发生突变,miR-15b不能显著下调荧光素酶的表达,提示miR-15b直接调控HOTAIR的表达;(5)miR-15b通过p53调控HOTAIR的表达,而p53也可以通过miR-15b调控HOTAIR的表达。共转染靶向HOTAIR和p53的si RNAs后,可以抑制HOTAIR si RNA引起的miR-15b表达上调,用HOTAIR si RNA和miR-15b抑制剂共转染可抑制miR-15b抑制剂导致p53表达下调。上述结果提示,miR-15b、HOTAIR和p53在胶质瘤细胞中形成了相互调节的环路。结论:本研究证实miR-15b在脑胶质瘤组织中的表达明显降低,且与病理级别呈负相关,miR-15b可作为胶质瘤的潜在独立预后因素,miR-15b/HOTAIR/p53形成调控环路调节胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭进程。这一发现不仅为miRNA与INc RNA之间的调控及其作用机制的研究提供了新的参考,也为胶质瘤的诊断和治疗提供了新的思路。