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目的:(1)探讨艰难梭菌毒素B受体结合区(CDB3)融合蛋白诱导表达最佳条件，分析其表达形式，并对其进行纯化。(2)制备抗CDB3单克隆抗体，纯化抗体并检测其特性。(3)建立一种双抗夹心ELISA，并用于临床腹泻患者粪便标本的艰难梭菌毒素B的检测。 研究方法:(1)以诱导前菌液浓度(OD600)、诱导温度、诱导剂IPTG浓度和诱导时间为单变量分别诱导融合蛋白表达，采用正交试验确定优化的融合蛋白表达条件，通过SDS-PAGE分析其表达形式，通过Western blot鉴定，并用GST SefinoseTM Kit对融合蛋白进行纯化。(2)用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术制备抗CDB3单克隆抗体，筛选阳性杂交瘤细胞，采用腹腔注射法大量制备抗体，鉴定其亚型并采用Protein G琼脂糖凝胶对其进行纯化，检测其浓度、分子量、效价、特异性、相对亲和力，并对其进行表位分析。(3)用改良过碘酸钠氧化法对4A4G2单克隆抗体标记辣根过氧化物酶(HRP)，通过棋盘滴定法建立并优化双抗夹心ELISA检测体系，并用该体系检测已经厌氧产毒培养确定的临床腹泻艰难梭菌感染患者的粪便标本。 结果:(1) CDB3融合蛋白诱导表达最佳条件是诱导前菌液浓度OD600为0.8、IPTG浓度为0.6mmol/L、诱导时间为12h及诱导温度为30℃，经SDS-PAGE确定融合蛋白以可溶性蛋白表达形式为主，纯化后纯度可达90％以上，经Western blot证实为目的蛋白。(2)经传统的杂交瘤技术，共获得5株克隆化阳性杂交瘤细胞株，亚型鉴定结果为1E7B2 IgG1（λ）、1F8D3 IgM(κ)、2F8A6 IgG2a(κ)、3B6F1 IgM（λ）和4A4G2 IgG1(κ)，采用辛酸-硫酸铵粗提和ProteinG琼脂糖凝胶亲和层析法对1E7B2、2F8A6和4A4G2单克隆抗体进行纯化，纯化效果90％以上，其分子量约160KD，检测其浓度分别为21.43μg/mL、53.32μg/mL和30.08μg/mL，相对亲和力4A4G2＞2F8A6＞1E7B2，经Western blot验证均为抗CDB3特异性抗体，其中2F8A6与4A4G2作用于CDB3不同表位。(3)成功制得酶标抗体HRP-4A4G2，用棋盘滴定法建立并优化了双抗夹心ELISA检测体系，厌氧产毒培养鉴定的15株A+B+型阳性标本用双抗夹心ELISA检测7株阳性(46.67％)，15株A-B+型标本检测8株阳性(53.33％)，15份CD阴性标本检测全为阴性。 结论:(1)成功诱导CDB3融合蛋白表达并对其进行纯化，其表达形式以可溶性蛋白为主。(2)成功建立了5株阳性杂交瘤细胞株，其中2F8A6与4A4G2为IgG型，具有较高的浓度和效价，且两者作用于CDB3不同表位。(3)双抗夹心ELISA检测体系特异度较高，但灵敏度较低，其检测体系还有待进一步改进。