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肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,手术切除是其首选治疗手段,但术后转移复发是制约远期疗效的重要因素之一。近年来研究发现,肿瘤转移是一个多步骤的复杂过程,包括肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移与粘附等。有许多信号转导通路参与了肿瘤细胞的转移过程的调控,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B (Phosphatidylinositol-3-kinase/Protein Kinase B, PI3K/Akt)信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用,与人类多种肿瘤的发生及发展密切相关。有文献表明PI3K/Akt信号通路可能通过促进肿瘤细胞内核转录因子κB (Nuclear Factor Kappa B,NF-κB)、基质金属蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase-2, MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix Metalloproteinase-9, MMP-9)的表达,进而促进肿瘤细胞的侵袭及迁移。南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thunb.)广泛分布于我国,功效祛风、除湿等。我课题组前期体内外研究发现,南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extracts, COE)有显著的抗肿瘤作用,但具体作用机制并不十分明确。本研究对COE体外抗人肝癌HepG2细胞的作用及相关机制进行了研究。目的：研究COE对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响,并进一步探讨相关分子机制。方法：不同浓度COE (20、40、80、160、320μg/mLL)处理人肝癌HepG2细胞24h或48h后,MTT法分析COE对细胞增殖能力的影响；并在倒置显微镜下观察细胞形态变化；Transwell小室法检测各药物浓度对HepG2细胞的侵袭及迁移能力的影响；Western blot法检测HepG2细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白’、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平。结果：不同浓度COE作用24h后,20、40、80、160及320μg/mL COE对HepG2细胞增殖抑制率分别为11.74±2.95,12.59±3.16,19.59±3.02,51.94±7.30及58.56±11.83,与阴性对照组1.37±12.04相比,各组均有显著差异(P<0.05或P<0.01),药物作用48h后,20、40、80、160及320COE对HepG2细胞增殖抑制率分别为18.57±9.89,27.11±10.12,39.62±7.63,70.80±3.74及77.27±2.91,与对照组1.99±13.68相比,各组均有显著差异(P<0.05或P<0.01)。说明COE对HepG2细胞的增殖有抑制作用,并呈时间剂量依赖性。不同浓度20、40、80、160及320μg/mL的COE作用细胞48h后,倒置显微镜下观察各组细胞形态变化,结果显示,与对照组相比,COE药物组贴壁的细胞数目随着药物浓度的增加而减少,细胞呈现出凋亡的形态特征。药物作用24h后,Transwell小室法检测细胞侵袭结果表明,与阴性对照组相比,COE药物组能不同程度的降低细胞穿膜数目,有显著差异(P<0.05或P<0.01)；Transwell小室法检测细胞迁移结果显示,视野中小室底膜贴壁的人肝癌HepG2细胞数目随着COE药物剂量的增加而减少,与对照组109±3.61相比,有显著差异(P<0.05或P<0.01)。综合上述结果,说明COE能抑制HepG2细胞的侵袭及迁移能力。加入不同浓度COE (20、40、80、16μg/mL)处理对数生长期HepG2细胞24h后,Western blot分析,结果显示,与对照组相比,COE对Akt的表达影响不明显,但能明显抑制p-Akt、NF-κBp65、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平。结论：COE能抑制人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,其机制可能与下调PI3K/Akt信号通路、NF-κBp65、MMP-2及MMP-9蛋白的表达有关。