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果梅(Prunus mume Sieb. et Zucc)源于中国,是一种重要的亚热带果树作物。季节性芽休眠是多年生植物适应外界的一种重要的生理机制。在木本植物中发现很多树种的休眠生物过程是由多基因调控的。大量研究表明植物激素在调控芽休眠过程中也起到了重要作用。为了进一步研究果梅季节性休眠机制,以国家果梅种质资源圃的果梅品种‘桃形梅’和‘丰后’为材料,首先利用数字基因谱测序(Digital gene expression,DGE),对休眠芽进行了差异基因的筛选,然后应用液相色谱-串联质谱法(Liquid chromatography-tandem triple quadrupole mass spectrometric, LC-MS/MS)检测相应激素在不同休眠期的变化,并且利用荧光定量PCR (real-time quantitative RT-PCR, qRT-PCR)测关键基因的差异表达分析。主要研究结果如下:1.采用DGE技术在转录水平上分析了果梅季节性休眠相关基因的差异表达。结果表明,四个不同休眠时期的花芽分别测出了19690、16527、19560和20971个相关基因。内休眠与抑制性休眠时期对比分析,得到7192个差异表达基因;生态休眠与内休眠时期对比分析,得到6042个差异表达基因;休眠解除与生态休眠时期对比分析,得到5723个差异基因。基因功能分析表明,休眠差异表达基因主要与细胞质、细胞浆的代谢以及与膜结合的细胞器等的代谢相关。通路富集注释分析显示,在内质网与核糖体通路中涉及的休眠差异表达基因频率较高。测序结果中还发现了,生长素,脱落酸(ABA),乙烯和茉莉酸(JA),以及锌指蛋白相关的基因在不同休眠时期表达差异显著,在果梅季节性休眠中有着重要的调控作用。2.运用qRT-PCR分析了果梅休眠ABA相关基因在不同休眠时期的‘桃形梅’和‘丰后’中的表达水平,结果表明,ABA相关基因在休眠前期表达量较高,其中上述两个基因在‘丰后’芽中表达量显著高于‘桃形梅’芽中的表达量。同时,我们应用LC-MS/MS法检测了不同休眠时期‘桃形梅’和‘丰后’花芽中的ABA含量。结果表明,两品种花芽中的ABA均在休眠前期含量较高。说明植物内源激素ABA对果梅休眠可能起到关键的作用。3.利用qRT-PCR分析了果梅休眠GA20ox在不同休眠时期的‘桃形梅’和‘丰后’中的表达水平,结果表明,GA20ox在休眠后期表达量较高。同时,我们应用LC-MS/MS法检测了不同休眠时期‘桃形梅’和‘丰后’花芽中的赤霉素(GA)含量。试验结果显示:两品种花芽中的GA含量在生态休眠和休眠解除时期相对较高。同时,两品种叶芽中的GA含量在后期显著增高。暗示植物内源激素GA对果梅休眠的重要性,且GA20ox是重要的调控基因。4.建立了不同果梅品种花芽四个休眠时期的茉莉酸含量的LC-MS/MS测定方法。样品经过甲醇提取,Agela Cleanert SPE-N H2固相萃取小柱净化,C18反相柱进行色谱分离。以乙腈-水(水相含0.05%乙酸)为流动相,质谱分析采用ESI负离子源和二级串联质谱模式。结果显示:方法标准曲线线性良好,R2(JA)=0.9992,平均回收率范围为78.18%-97.49%,1.25%-8.27%(RSD,n=3)的相对标准偏差。该方法操作简便、灵敏度高、选择性好、回收率高,适合果梅花芽中JA的测定。结果表明,被测两个品种的果梅花芽中,休眠解除和生态休眠时期的JA含量高于内休眠和抑制性休眠时期的,说明内源激素JA可能有抑制果梅休眠和促进花芽正常生长的作用。