莲子心提取物对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiayin228699
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目的:  1、通过建立糖尿病肾病(DN)大鼠为动物模型,从血、尿生化、肾脏病理组织形态等,从“量-效”和“时-效”角度研究莲子心提取物对糖尿病肾病的作用;  2、探讨莲子心提取物对糖尿病肾病肾脏保护的作用机制,观察莲子心提取物体内对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏转录活化蛋白-1(AP-1)、TGF-β1蛋白、p38MAPK、Smad7蛋白表达的影响;再通过体外培养肾小球系膜细胞(MC),测定莲子心提取物对MC细胞增殖、MC细胞Smad7及TGF-β1蛋白表达的影响,从TGF-β1/Smad7、TGF-β1/p38MAPK信号转导途径来探索莲子心提取物对糖尿病肾病肾脏保护作用的可能机制。  方法一:通过尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病肾病模型,莲子心提取物连续给药12周,从“时-效”和“量-效”角度研究莲子心提取物对下列指标的影响。  检测指标:(1)在给药过程中每天观察一般状况及死亡情况;(2)每周称体重1次;(3)给药4周、8周、12周时分别检测饮水量、24h尿量;取血检测血糖(Glu)、肌酐(Crea)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB);取尿检测24h尿白蛋白定量、尿微量蛋白、尿肌酐、尿素氮。(4)连续给药8周后,正常组大鼠处死5只,其余各组大鼠处死6只,在给药12周后全部处死其余动物。检测指标有:糖化血红蛋白、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高低密度脂蛋白(HDL-c、LDL-c),大鼠肾脏、心脏、胸腺、脾脏重量及指数,肾脏PAS染色观察肾小球面积、PAS阳性区域面积、PAS阳性区域面积占肾小球面积百分比,肾脏病理组织观察。  结果:  (1)控制血糖:本实验结果表明莲子心提取物在给药4周、8周、12周均能明显降低DN大鼠血糖。早期控制糖代谢紊乱至关重要,血糖控制良好可以纠正和预防肾脏病变,肾功能也得到改善。  (2)抑制肾脏肥大、降低尿蛋白、降低血肌酐、增加尿肌酐的排泄量、保护肾功能:本实验结果提示:莲子心提取物高剂量能显著降低DN大鼠的肾脏指数;中剂量或高剂量能不同程度增加24h尿液肌酐和尿素氮的含量、降低24h尿微量蛋白及尿蛋白定量;降低血清肌酐及糖化血红蛋白含量;降低肾脏及胰腺病变发生率及病变程度;抑制和降低STZ所致DN大鼠肾小球系膜区增厚增宽和PAS阳性组区域占肾小球面积的百分比,对DN大鼠肾脏有较好的保护作用,可缓解大鼠糖尿病肾病的进程,并表现出一定的“时-效”和“量-效”关系。  (3)改善脂代谢紊乱:本实验结果显示,莲子心提取物长期给药能明显降低DN大鼠血清胆固醇、甘油三脂及LDL-c水平,同时升高HDL-c水平,对脂代谢有改善作用。  方法二:通过尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病肾病模型,莲子心提取物连续给药12周,采肾组织标本,采用免疫组化检测AP-1蛋白含量、TGF-β1蛋白、p38MAPK(p-p38MAPK)及Smad7蛋白表达的影响。  结果:  结果显示,莲子心提取物干预DN大鼠后,肾组织TGF-β1、AP1、p38 MAPK表达下调(P<0.05,P<0.01),上调肾组织Smad7的表达(P<0.05,P<0.01),并有一定的量效关系,结果提示该药机制可能TGF-β1/Smad7或TGF-β1/p38 MAPK信号通路传导有一定的调控作用。  方法三:通过培养肾系膜细胞(MC),利用MTT法测定MC细胞的增殖;ELISA法测定培养上清液Smad7的含量;RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA的表达,研究莲子心提取物对上述指标的影响。  结果:  本研究结果显示,和正常培养组比较,高糖培养组MC细胞增殖明显;莲子心提取物能明显抑制高糖所致的MC细胞增殖;同时,与正常葡萄糖组比较,高糖培养组MC细胞上清中和TGF-β1mRNA的表达增加,MC细胞中Smad7基因表达下调(P
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