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猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的,一种可致仔猪严重腹泻的高度接触性肠道传染病。近年来由于PEDV毒株的变异,原有的疫苗防控效果受到影响,对该病的防控提出了更高的要求。但是目前对新流行毒株的致病机理尚不明确,缺乏高效特异的诊断方法,迫切需要对其开展基础和应用研究。本研究通过超速离心的方法纯化PEDV全病毒后免疫小鼠,制备了13株阳性杂交瘤细胞株:F1-D6、F21-D5、F21-F3、F21-F5、F31-D3、F31-D6、F31-F3、F31-F5、F31-G3、F31-G4、F42-C6、F51-F4、F51-G4,通过IFA、ELISA以及Western blot检测,确定其中能特异性识别PEDV N蛋白的细胞株有3株:F31-D3、F31-F3、F1-D6,能与PEDV S蛋白特异性结合的细胞株有1株,为F42-C6。PEDV S蛋白是PEDV的一个重要结构蛋白,它既含有介导病毒侵入宿主细胞的受体结合域,又拥有介导机体产生病毒中和抗体的抗原表位。因此,选取单抗F42-C6,鉴定其识别的抗原表位。以毒株SHpd/2012为模板构建并表达了相互重叠的融合蛋白S11、S12、S13、S21、S22,结果显示F42-C6能特异性识别截短蛋白S13。对S13融合蛋白进行进一步截短表达以精确定位其抗原表位,结果表明:F42-C6识别PEDV S蛋白的抗原表位的最小功能域为:706AYVDDD711。对鉴定所得到的抗原表位进行特异性分析,得出结论:该抗原表位在不同的PEDV经典毒株之间相对保守,而在不同的PEDV流行毒株之间却是高度保守的。通过上述研究,为PEDV诊断方法的建立和抗原特性研究提供了有效工具,并为日后致病机理的研究奠定了基础。