本研究旨在构建人天然噬菌体单链抗体库，以TNF-α为靶标，从该抗体库中筛选到抗TNF-α的单链抗体，以期有助于类风湿关节炎等疾病的诊治，并说明该抗体库可用于人源抗体的筛选。 在实验中我们从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA，用RT-PCR扩增人抗体重链（V_H）和轻链（V_L）可变区基因，得到了6种的VH家族基因，11种V_L家族基因，这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95％以上。采用改进的SOE PCR法将V_H基因和V_L基因连接成人单链抗体（scFv）基因，并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中，将连接产物电转化大肠杆菌TG1，经辅助噬菌体M13KO7超感染，构建了库容为5.58×10⁹的噬菌体单链抗体库。采用BstN□酶切法证明，构建的噬菌体单链抗体库具有良好的多样性。 分离纯化TNF-α，并鉴定其活性。以TNF-α为靶标对抗体库进行7轮的筛选富集，以HPO、人整合素β₃胞外区蛋白为靶标作ELISA鉴定结合特异性，获得与TNF-α特异性结合的噬菌体scFv-T16。将其转化非抑制型大肠杆菌TOP10，IPTG诱导表达，SDS-PAGE、Westem blot检测表明，单链抗体在E．coli TOP10中得到了可溶性表达。 将筛选到的seFv-T16基因克隆入pET-28a载体，成功的构建了高效原核表达载体pET28a-scFv-T16，诱导表达产物scFv-T16在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在，变性条件下用Ni-NTA金属离子螯合层析柱亲和层析分离纯化，并对纯化样品进行了复性研究。 本实验取得的结果为抗TNF-α单抗药物的进一步研究奠定了基础。