化瘤散结丹(含药血清)诱导人宫颈癌细胞系Hela细胞凋亡的实验研究

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研究目的: 1.运用血清药理学方法研究抗肿瘤新药化瘤散结丹对人宫颈癌细胞系HeLa细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用及对细胞周期的影响。 2.探讨化瘤散结丹抗肿瘤作用的可能机理。 3.了解化瘤散结丹的急性毒理效应。 研究方法: 1.按照血清药理学方法的要求制备含药血清:将化瘤散结丹制成水煎剂给家兔灌胃,获取兔血并分离血清。 2.细胞培养:将人宫颈癌细胞系HeLa细胞接种在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中,置37℃含5%CO_2的培养箱中培养。 3.选择不同浓度的含药血清与人宫颈癌细胞系HeLa细胞共同作用24小时,用倒置显微镜观察细胞形态学改变;用MTT还原法检测光密度值(OD值),计算抑制率;用流式细胞术(FCM)检测化瘤散结丹诱导HeLa细胞凋亡的效应以及对细胞周期的影响。 4.急性毒性实验采用小鼠以口服灌胃方式给药,连续观察7天,统计动物死亡数,获取相关实验数据并用改良寇氏法测定其LD50。 研究结果: 1.HeLa细胞经含药兔血清作用24小时后,由贴壁生长转为逐渐脱落。培养液中有许多细胞碎片悬浮,细胞形态变圆、体积缩小、细胞间出现明显空隙。而空白组和盐水组细胞贴壁生长良好,相邻细胞生长融合,呈现多角形,培养液中无或仅见少许细胞碎片。 2.含药血清大、中、小剂量组抑制率分别为56.10%、48.37%、34.31%,明显高于空白组和盐水组(P<0.05);且大剂量组明显高于中、小剂量组(P<0.05)。 3.含药血清大、中剂量组诱导细胞凋亡百分率分别为21.58%、13.32%,与空白组和盐水组相比有显著差异(P<0.05);此外,与空白组和盐水组相比,中药大、中剂量组均使G0/G1期细胞明显减少,G2/M期细胞明显增加,S期细胞明显减少,细胞周期被不同程度的阻滞在G2/M期;小剂量组使G0/G1期细胞明显增加,G2/M期细胞明显减少,S期细胞明显减少。 4.化瘤散结丹经口灌胃的LD50为:10.11 g/kg;95%可信限为:9.41~10.81g/kg 研究结论: 1.化瘤散结丹(含药血清)可抑制人宫颈癌细胞系HeLa细胞的生长; 2.化瘤散结丹(含药血清)大、中剂量组可诱导HeLa细胞凋亡; 3.化瘤散结丹(含药血清)对HeLa细胞增殖周期有影响;细胞周期G2/M期阻滞可能是湖北中医学院2001级硕士学位论文 化瘤散结丹诱导HeLa细胞凋亡的机制之一。4.化瘤散结丹(含药血清)诱导HeLa细胞凋亡与药物浓度及作用时间相关:浓度太小, 时间太短(2.5%,12h)不足以诱导凋亡;浓度太高,时间太长(15%,36h)容易 引起细胞坏死。5.化瘤散结丹经口灌胃的LDS。为:10.119/kg;化瘤散结丹具有一定的毒性。
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