[目的]研究GV115-Survivin转染反分化椎间盘髓核细胞的生物学效应,构建慢病毒GV115-Caspase3 si RNA并研究其生物学效应。[方法]采用组织块法分离培养人椎间盘髓核细胞,采用绿色荧光素标记法检测慢病毒载体对其转染效率。通过免疫荧光法、MTT法、Western-Blot法和Antonopulos法检测比较GV115-Survivin对反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞Survivin表达、细胞活性、II型胶原和蛋白多糖合成的影响。根据RNA干扰序列设计原则,设计4个可能的Caspase-3 si RNA序列。应用全基因合成技术和亚克隆技术构建GV115-Caspase3 si RNA并采用PCR和测序对其鉴定。病毒包装后转染人胚肾293T细胞,通过应用RT-PCR技术检测转染后Caspase-3基因敲减效率,筛选高效的GV115-Caspase3 si RNA。采用组织块法分离培养人椎间盘髓核细胞,通过绿色荧光素标记法检测GV115-Caspase3 si RNA对其转染效率。通过免疫荧光法、MTT法、Western-Blot法和Antonopulos法检测GV115-Caspase3 si RNA对反分化晚期髓核细胞Caspase-3表达、细胞活性、II型胶原和蛋白多糖合成的影响。[结果]GV115-Survivin可高效转染反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞,并促进Survivin表达。对于反分化早期椎间盘髓核细胞,可增强髓核细胞的活性,并促进II型胶原和蛋白多糖的合成;对于反分化晚期的髓核细胞,反而抑制髓核细胞活性以及II型胶原和蛋白多糖的合成。GV115-Caspase3 si RNA质粒PCR鉴定显示位于341bp附近的条带。测序结果与设计的基因序列完全吻合。4个可能的Caspase-3si RNA序列中基因敲减效率最高的可达到84.2%。GV115-Caspase3 si RNA可高效转染人椎间盘髓核细胞,并抑制反分化晚期Caspase-3表达,增强细胞活性、II型胶原和蛋白多糖的合成。[结论]GV115-Survivin可增强反分化早期椎间盘髓核细胞的活性并促进细胞外基质的合成,而对于反分化晚期椎间盘髓核细胞则不适宜采用Survivin基因;成功构建高效的GV115-Caspase3 si RNA重组表达系统,其可增强反分化晚期椎间盘髓核细胞的活性并促进细胞外基质的合成。